тах, подостром бактериальном эндокардите, некоторых паразитарных поражениях.
Снижение его синтеза в печени обнаруживается при следующих процессах: острые и хронические заболевания печени, амилоидоз, нарушение питания, злокачественные новообразования, застойная сердечная недостаточность, перикардит, поражение клапанов сердца, врожденная анальбуминемия.
Увеличение потери через поверхность тела происходит при нефротическом синдроме, термических ожогах, травмах и раздавливании тканей, транссудации и экссудации из полых органов или эпителиальных поверхностей, после кровотечения и введения кровозамещающих жидкостей, желудочно-кишечных и лимфатических фистулах, повторных торакоцентезах или парацентезах, энтеропатиях, связанных с повышенной чувствительностью к пищевым продуктам (к глютену в злаках).
Повышение катаболизма отмечается при повышенной температуре тела, действии антиметаболитов, некоторых состояниях гиперметаболизма гормонального происхождения (болезнь Кушинга, тиреотоксикоз, преэклампсия).
Повышение объема крови (гиперволемия) характерно для таких состояний, как беременность, введение экзогенных эстрогенов, моноклональные иммунопатии, застойная сердечная недостаточность.
α1-фракция содержит в основном α1-антитрипсин, кислый α1-гликопротеин (орозомукоид), протромбин, тиреоидсвязывающий глобулин. Из перечисленных белков α1-антитрипсин – белок острой фазы, повышен при многочисленных острых, подострых, хронических воспалительных и неопластических заболеваниях, а также при заболеваниях печени. Снижение содержания имеет место при наследственном дефиците α1-антитрипсина.
α2-глобулиновая зона содержит α2-макроглобулин, гаптоглобин, церулоплазмин, α-липопротеид, эритропоэтин. – Увеличение α2-фракции имеет место при нефротическом синдроме, некоторых подострых и хронических воспалительных и неопластических заболеваниях, стадиях восстановления после термических ожогов. Снижение содержания α2-фракции развивается при сахарном диабете, панкреатите, гемолизе.
β-фракция содержит трансферрин, гемопексин, β-липопротеиды. Увеличение содержания β-глобулинов развивается при первичных или вторичных гиперлипопротеинемиях (особенно II типа), моноклональных β-патиях. Снижение содержания белка имеет место при гипо-β-липопротеинемиях, дефиците IgA.
γ-фракция содержит иммуноглобулины G, A, D, М. Наличие на электрофореграммах пиков М-белков во фракциях γ-, β- или α2-глобулинов требует проведения иммуноэлектрофореза для уточнения характера моноклональных γ-патий.
Увеличение содержания γ-глобулинов встречается при поликлональных γ-патиях – хронических заболеваниях печени, хронических инфекциях, некоторых аутоиммунных заболеваниях; моноклональных γ-патиях – заболеваниях, протекающих с дискразией или лимфопролиферацией клеток лимфоидной ткани (миелома, макроглобулинемия, амилоидоз, лимфома, хроническая лимфоцитарная лейкемия).
Снижение содержания γ-глобулинов встречается при иммунодефицитах или иммуносупрессиях, лимфопролиферативных заболеваниях.
Унифицированный метод проведения тимоловой пробы
Тимоловая проба относится к коллоидно-осадочным, или флокуляционным, реакциям белков плазмы. Флокуляция (осаждение) белков обычно наступает при изменении их заряда, снижении количества воды в сольватной оболочке, увеличении размеров коллоидных частиц.
Принцип метода
Тимоловая проба основана на помутнении смеси при взаимодействии сыворотки с насыщенным раствором тимола в вероналовом буфере (табл. 8).
При взаимодействии тимоло-вероналового буфера с крупнодисперсными белками плазмы (β- и γ-глобулинами) помутнение образует глобулиново-тимол-липидный комплекс.
Необходимые реактивы
1. Тимол, 100 г/л спиртовой раствор: 10 г очищенного тимола растворяют в 96 %-ном этиловом спирте в мерной колбе вместимостью 100 мл.
Очистка тимола: 100 г тимола растворяют в 100 мл 96 %– ного этилового спирта, фильтруют. К фильтрату прибавляют 1 л холодной воды, сильно встряхивают и оставляют стоять на 20 мин.
Затем фильтруют; кристаллы, оставшиеся на фильтре, промывают 2 раза холодной водой, сушат до постоянной массы вначале на фильтровальной бумаге, затем в течение 2–3 дней в эксикаторе над безводным хлоридом кальция.
2. 5,5-диэтилбарбитуровая кислота (веронал), фарм.
3. 5,5-диэтилбарбитуровой кислоты натриевая соль (мединал), фарм.
4. Буферный раствор: 2,76 г веронала и 2,06 г мединала растворяют и доводят водой до 1 л. Хранят в холодильнике; при появлении осадка раствор не годится к употреблению.
5. Тимолово-вероналовый буфер рН 7,55–7,6: в мерной колбе вместимостью 100 мл смешивают 80 мл буферного раствора и 1 мл 100 г/л спиртового раствора тимола, встряхивают и доливают буферным раствором до метки. Проверяют рН.
6. Бария хлорид.
7. Калибровочный раствор:
– раствор хлорида бария: 1,175 г хлорида бария растворяют и доводят до 100 мл водой;
– серная кислота, 0,1 моль/л.
Суспензия сульфата бария: 3 мл раствора хлорида бария наливают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем до метки 0,1 моль/л раствором серной кислоты, при температуре 10 °C (при этой температуре размеры частиц преципитированного сульфата бария дают относительно стабильный результат). Суспензию сульфата бария готовят перед употреблением.
Ход определения
К 6 мл тимолово-вероналового буферного раствора прибавляют 0,1 мл сыворотки, оставляют стоять 30 мин и затем измеряют оптическую плотность при длине волны 630–690 нм (красный светофильтр) против тимолово-вероналового буфера в кюветах с толщиной слоя в 1 см. Реакцию проводят при комнатной температуре.
Расчет ведут по калибровочному графику.
Построение калибровочного графика: из калибровочного раствора сульфата бария (суспензии) готовят разведения, соответствующие единицам помутнения по Шенк – Хогланд. Калибровочные растворы хорошо встряхивают и тотчас при длине волны 630–690 нм в кюветах с толщиной слоя в 1 см против воды измеряют.
Таблица 8
Тимоловая проба
Примечание
Можно использовать готовый набор реактивов Био-Ла-Тест «Тимоловая проба» («Лахема»), в состав которого входят трис-буфер и малеиновая кислота.
Подобно всем флокуляционным тестам, тимоловая проба является неспецифической реакцией.
Однако она достаточно информативна для оценки функционального состояния печени. Проба положительна в 90–100 % случаев при вирусном гепатите уже в преджелтушной стадии, при безжелтушной форме заболевания, а также при токсическом гепатите, постнекротическом циррозе печени, коллагенозах, малярии, вирусных инфекциях. При механической желтухе проба отрицательна.
Норма – 0,4 единицы.
Определение компонентов остаточного азота
Азотистый обмен включает реакции синтеза и распада белков, нуклеиновых кислот, аминокислот, нуклеотидов, а также ряда других азотсодержащих соединений. Для оценки состояния азотистого обмена определяют фракции остаточного азота в сыворотке или в цельной крови. Остаточный азот – это небелковый азот или азот, который остается в центрифугате (фильтрате) сыворотки крови или другой биожидкости после осаждения белков трихлоруксусной, фосфорно-молибденовой или фосфорно-вольфрамовой кислотой. Содержание остаточного азота и его компонентов в сыворотке крови в норме:
1) остаточный азот – 14,3–28,6 ммоль/л;
2) мочевина – 2,50–8,33 ммоль/л;
3) аминоазот (азот аминокислот)– 0,02–0,05 г/л;
4) мочевая кислота М – 0,24–0,50 ммоль/л, Ж – 0,16–0,44 ммоль/л;
5) креатин – 102–408 мкмоль/л;
6) креатинин М – 71–115 мкмоль/л, Ж – 53–97 мкмоль/л;
7) индикан – 0,87–3,13 мкмоль/л;
8) аммиак (цельная кровь) – 17–34 мкмоль/л;
9) ксантопротеиновая реакция – 20 условных единиц.
Увеличение концентрации остаточного азота выше 0,4–0,5 г/л обозначается термином «азотемия». Абсолютная азотемия связана либо с задержкой азотистых шлаков при нарушении функции почек (почечная или ретенционная азотемия) либо с их усиленным образованием (внепочечная или продукционная азотемия). Относительная азотемия наблюдается при дегидратации организма.
Считается, что резкое повышение фракций остаточного азота является плохим прогностическим признаком. Однако следует иметь в виду, что при острых заболеваниях азотемия может носить временный характер.
Основным компонентом фракций остаточного азота является азот мочевины, на долю которого приходится более половины всего остаточного азота.
Методы исследования мочевины сыворотки крови
Из всего разнообразия методов исследования мочевины в качестве унифицированных в лабораториях утверждены следующие:
1) экспресс-метод определения содержания мочевины с использованием реактивной бумаги «Уратест»;
2) диацетилмонооксимный метод, который может быть применен при работе как с отечественными реактивами, так и с наборами реактивов фирмы «Лахема»;
3) ферментативный метод с применением кристаллического препарата уреазы.
Принцип метода
Мочевина образует с диацетилмонооксимом в сильнокислой среде в присутствии тиосемикарбазида и ионов трехвалентного железа красный комплекс.
Необходимые реактивы
1. Трихлоруксусная кислота, 100 г/л.
2. Диацетилмонооксим, 25 г/л водный раствор. Реактив стабилен.
3. Тиосемикарбазид, 2,5 г/л водный раствор. Для приготовления реактива можно пользоваться также тиосемикарбазида гидрохлоридом; последний применяется в виде 3,2 г/л водного раствора.
Оба реактива стабильны при хранении в темной посуде при комнатной температуре.
4. Серная кислота концентрированная.
5. Ортофосфорная кислота 85 %-ная.
6. Хлорное железо. Основной раствор хлорного железа: 5 г хлорного железа доводят до 100 мл водой и подкисляют добавлением 1 мл концентрированной серной кислоты. Из основного раствора готовят рабочий раствор хлорного железа: 1 мл основного раствора хлорного железа доводят до 100 мл водой, затем добавляют 8 мл концентрированной серной кислоты и 1 мл 85 %-ной ортофосфорной кислоты. Хранят в темной посуде. Годен в течение 2 недель.