= концентрация креатинина в моче (ммоль/л) ×
× минутный диурез (мл) / концентрация креатинина в крови (мкмоль/л);
реабсорбция (%) = клубочковая фильтрация —
– минутный диурез × 100 / клубочковая фильтрация.
Клубочковая фильтрация в норме составляет 80–120 мл/ мин, реабсорбция – 97–99 %.
Критерии снижения скорости клубочковой фильтрации:
1) пограничное – 62–80 мл/мин;
2) незначительное – 52–63 мл/мин;
3) легкое – 42–52 мл/мин;
4) умеренное – 28–42 мл/мин;
5) выраженное – менее 28 мл/мин.
Методы исследования мочевой кислоты сыворотки крови
Мочевая кислота является продуктом распада пуриновых нуклеотидов, входящих в состав нуклеиновых кислот, макроэргических соединений, некоторых коферментов. Из эндогенных нуклеотидов в организме человека образуется около 500 мг мочевой кислоты, из поступающих с пищей – примерно 200 мг. Большая часть мочевой кислоты, образовавшейся в тканях, выделяется с мочой (до 75 %), остальная часть экскретируется с калом. Величина экскреции мочевой кислоты с мочой зависит от присутствия пуринов в пище: при обычной диете с мочой ежедневно выделяется до 0,7 г мочевой кислоты, при богатой пуринами диете – до 1 г. В клинико-диагностических лабораториях для определения мочевой кислоты используют колориметрический и ферментативный методы.
Нормальные величины:
1) мужчины до 60 лет – 0,1–0,40 ммоль/л (4,0–8,5 мг/дл); мужчины старше 60 лет – 0,25–0,47 ммоль/л;
2) женщины до 60 лет – 0,24–0,50 ммоль/л (2,8–7,5 мг/дл); женщины старше 60 лет – 0,19–0,43 ммоль/л.
Принцип метода
Мочевая кислота восстанавливает фосфорно-вольфрамовый реактив с образованием соединения голубого цвета.
Необходимые реактивы
1. Серная кислота, 0,35 моль/л: к 200 мл воды добавляют 10 мл концентрированной серной кислоты относительной плотности 1,84 и доводят объем водой до 500 мл.
2. Натрий вольфрамовокислый двухводный (Na2WO4 × 2H2O), 100 г/л: растворяют 50 г вольфрамовокислого натрия в небольшом количестве воды и доводят объем до 500 мл.
3. Натрия карбонат, 103 г/л: растворяют 51,5 г натрия карбоната в небольшом количестве воды и доводят объем до 500 мл.
4. Ортофосфорная кислота 85 %-ная.
5. Лития сульфат.
6. Лития карбонат.
7. Фосфорно-вольфрамовый реактив; в круглодонную колбу вместимостью 1,5 л вносят 40 г вольфрамовокислого натрия и 300 мл воды. Добавляют 32 мл 85 %-ной ортофосфорной кислоты и несколько стеклянных бусинок. Осторожно кипятят в течение 2 ч на песочной или глицериновой бане с обратным холодильником.
Охлаждают до комнатной температуры и доливают водой до 1 л. Добавляют 32 г сульфата лития. Раствор стабилен при хранении в холодильнике.
8. Мочевая кислота.
9. Формалин, не ниже 37,5 %-ной концентрации.
10. Основной калибровочный раствор мочевой кислоты, 6 ммоль/л: растворяют 0,6 г карбоната лития в 150 мл воды, фильтруют и нагревают до 60 °C. Взвешивают 1,017 г мочевой кислоты, вносят в предварительно нагретую колбу вместимостью 1 л, вливают теплый раствор карбоната лития и быстро встряхивают. После растворения мочевой кислоты колбу охлаждают до комнатной температуры, добавляют 20 мл раствора формалина, наливают 300–350 мл воды. Добавляют несколько капель раствора метилового оранжевого, затем встряхивают, медленно добавляют 20–22 мл 0,35 моль/л серной кислоты до изменения цвета в розовый. Доливают колбу до метки водой. Раствор стабилен при хранении в холодильнике в посуде из темного стекла; 1 мл раствора содержит 0,006 ммоль мочевой кислоты.
11. Рабочий калибровочный раствор мочевой кислоты, 0,03 ммоль/л: 1 мл основного калибровочного раствора доводят до 200 мл водой. Стабилен в течение 2 недель при хранении в холодильнике.
Ход определения
Опытная проба: к 8 мл воды добавляют 1 мл сыворотки, 0,5 мл 0,35 моль/л серной кислоты и перемешивают. Затем добавляют 0,5 мл раствора вольфрамовокислого натрия и тщательно перемешивают. Через 5–10 мин фильтруют. К 3 мл фильтрата добавляют 1,5 мл раствора натрия карбоната, перемешивают. Затем добавляют 1 мл фосфорно-вольфрамового реактива, перемешивают, переворачивая пробирку. Через 30 мин измеряют в кювете с толщиной слоя в 1 см при длине волны 590–700 нм (красный светофильтр) против холостой пробы. Холостую пробу ставят так же, как опытную, но вместо фильтрата берут 3 мл воды.
Расчет ведут по формуле при сравнении с калибровочной пробой. Калибровочную пробу ставят и измеряют так же, как опытную, но вместо фильтрата берут 3 мл рабочего калибровочного раствора.
Концентрация мочевой кислоты, ммоль/л:
Еоп / Ек × Ск × 10,
где Еоп – экстинкция опытной пробы;
Ек – экстинкция калибровочной пробы;
Ск – концентрация рабочего калибровочного раствора, 0,03 ммоль/л;
10 – пересчет на объем сыворотки (в опытную пробу берут 0,3 мл, т. е. в 10 раз меньше, чем в калибровочную пробу).
Клинико-диагностическое значение
Исследование содержания мочевой кислоты в сыворотке крови имеет значение для диагностики начальных стадий поражения почек и подагры.
Считают, что при поражении клубочков почки (острый и хронический нефрит, первично- и вторично-сморщенная почка) в первую очередь страдает выделение мочевой кислоты и индикана, вследствие чего наблюдается гиперурикемия. При очаговых нефритах и нефрозах выделение мочевой кислоты не нарушается.
При подагре наблюдается нарушение обмена нуклеопротеидов, вызывающее отложение солей мочевой кислоты в суставах и различных тканях тела.
Много мочевой кислоты определяется в крови и моче при патологических состояниях, связанных с усиленным распадом нуклеопротеидов: лейкозах, лейкемии, после облучения рентгеновскими лучами, лейкопении, полицитемии, эритремии, гемолитической желтухе, злокачественной анемии в стадии ремиссии, злокачественных новообразованиях, а также при сердечной и печеночной недостаточности, диабете, голодании, усиленном потреблении жирной пищи, аллергии, гипертрофии предстательной железы, илеусе, артрите, ацидозе, пневмонии в стадии резорбции, отравлении свинцом и угарным газом.
Снижение содержания кислоты в сыворотке крови отмечается при анемии, после приема пиперазина, атофана, салицилатов и АКТГ.
Методы исследования пигментного обмена
В основе образования билирубина лежит деградация гема гемоглобина и других гемсодержащих белков и ферментов. Гем распадается до биливердина, который восстанавливается в билирубин.
Свободный билирубин токсичен, не растворяются в воде и циркулирует в крови в комплексе с альбуминами. Этот билирубин дает непрямую реакцию Ван ден Берга (после осаждения альбуминов спиртом), поэтому называется непрямым.
Непрямой билирубин, будучи связанным с альбуминами, не проходит через неповрежденные мембраны почечных клубочков и не фильтруется в мочу.
Выведение билирубина осуществляется с желчью через кишечник. Билирубин, связанный с альбуминами, доставляется кровью в печень. Билирубин легко проникает через мембраны гепатоцитов, альбумины остаются в кровотоке.
В гепатоцитах билирубин подвергается конъюгации с глюкуроновой кислотой, превращаясь в билирубинмоно- и диглюкуронид.
Образованные билирубинглюкурониды нетоксичны, легко растворимы. Они направляются с желчью в кишечник для выведения из организма.
Из кишечника билирубинглюкурониды частично поступают в кровоток и, находясь в крови, представляют собой фракцию прямого билирубин, который дает прямую реакцию Ван ден Берга. Прямой билирубин в отличие от непрямого легко проникает через почечные фильтры и может выделяться с мочой.
В физиологических условиях сыворотка крови содержит примерно 25 % прямого билирубина (связанного с глюкуроновой кислотой) и 75 % непрямого билирубина (альбумин-билирубина).
Таким образом, общий билирубин крови представляет собой суммарное количество непрямого и прямого билирубина.
У здоровых людей в сыворотке крови содержится: общего билирубина 3,4–20,5 мкмоль/л; прямого (конъюгированного) – 0,86–5,3 мкмоль/л; непрямого (свободного) – 1,7–17,1 мкмоль/л.
Для определения билирубина используется колориметрический метод, основу которого составляет реакция Ван ден Берга. Реакция протекает в 2 стадии: на первой под воздействием соляной кислоты разрывается тетрапирроловая цепь, в результате чего образуются два дипиррола, на второй – оба дипирроловых производных диазотируются диазофенилсульфоновой кислотой с превращением их в азобилирубин. Фракционное содержание билирубина определяется с помощью модифицированного метода Ван ден Берга, предложенного Ендрассиком. Метод принят в качестве унифицированного.
Принцип метода Ван ден Берга
Билирубин вступает в реакцию азосочетания с диазотированной сульфаниловой кислотой с образованием раствора азокрасителя. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию билирубина и выявляется фотометрически.
Оригинальным методом Ван ден Берга устанавливается лишь характер реакции (прямая, непрямая, замедленная), т. е. отмечается преобладание в сыворотке крови того или иного билирубина. Метод Ендрассика, Клеггорна и Грофа дает возможность фракционно определять содержание билирубина. Он прост, удобен в практике, не связан с применением дефицитных реактивов и является наиболее приемлемым для практических лабораторий.
Определение рекомендуется проводить сразу же после забора проб, чтобы избежать окисления билирубина на свету. Гемолиз сыворотки снижает количество билирубина пропорционально присутствию гемоглобина. Следовательно, сыворотка крови не должна быть гемолизирована.