Результаты рассчитывают по калибровочному графику. После окончания анализа надо с особой тщательностью промыть и просушить распылитель согласно заводской инструкции. Это очень ответственная и легко повреждаемая деталь прибора, коррозия которой или засорение делает невозможным выполнение анализа.
Содержание натрия в плазме крови определяют так же, как и содержание калия, с той разницей, что исследуемый материал разводят, как правило, в 100 раз и используют калибровочный раствор для определения натрия.
Принцип метода
Определение натрия и калия в моче аналогично их определению в плазме крови с той разницей, что размах физиологических колебаний здесь больше, а различие между концентрациями Na и К не так велико, как в плазме, поэтому требования к точности меньше, следовательно, можно работать с общим калибровочным раствором.
Приготовление калибровочного раствора
Используют те же исходные калибровочные растворы, что и при анализе плазмы. Для приготовления основного калибровочного раствора в мерную колбу вместимостью 100 мл вносят 8 мл исходного калибровочного раствора хлорида натрия, содержащего 1000 ммоль/л, и 20 мл раствора хлорида калия, содержащего 100 ммоль/л, и доводят водой до метки 100 мл. Получается раствор, содержащий 80 ммоль/ л Na и 20 ммоль/ л К. Из него готовят разведения согласно таблице 23.
Таблица 23
Определение электролитов в моче
Ход исследования
Если в исследуемом материале имеется осадок, его тщательно перемешивают, 0,5 мл мочи вносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят до метки водой либо 1 мл вносят в колбу вместимостью 100 мл и доводят водой до метки. На пламенном фотометре сжигают сначала калибровочные растворы, затем исследуемые и снова повторяют калибровку.
Принцип метода
Эритроциты отделяют центрифугированием, гемолизируют водой и определяют содержание электролитов методом фотометрии пламени. В связи с тем что между эритроцитами всегда остается некоторое количество плазмы, большое значение имеет единообразие режимов центрифугирования; приведенный ниже режим рекомендован в качестве унифицированного.
Приготовление калибровочных растворов
В качестве исходных используют те же растворы, что и при определении натрия и калия в плазме.
1. Рабочий калибровочный раствор для определения калия в эритроцитах.
В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят 3,84 мл исходного калибровочного раствора КСl, содержащего 100 ммоль/л, и доводят объем водой до 100 мл; получается основной калибровочный раствор с концентрацией 3,84 ммоль/л. Из него готовят разведения согласно таблице 24.
Таблица 24
Определение электролитов в эритроцитах
2. Рабочий калибровочный раствор для определения натрия в эритроцитах.
В мерную колбу вместимостью 1 л вносят 33 мл исходного калибровочного раствора КСl, содержащего 100 ммоль/л, и доводят до 1 л; получается фоновый раствор, содержащий 3,3 ммоль/л КСl. В колбу вместимостью 100 мл вносят 1 мл исходного калибровочного раствора NaCl, содержащего 1000 ммоль/л, и доводят до объема 100 мл фоновым раствором, содержащим 3,3 ммоль/л КСl; получается раствор, содержащий 10 ммоль/л NaCl и 3,3 ммоль/л КСl. Из полученных растворов готовят разведение согласно таблице 25.
Таблица 25
Определение натрия в эритроцитах
Ход исследования
Кровь для исследования берут с гепарином из Расчета 5 мг (650 ЕД) на 1 мл, центрифугируют в течение 15 мин при скорости 3000 об./мин, отсасывают плазму с верхним слоем эритроцитов и снова центрифугируют в течение 30 мин при скорости 3000 об./мин и удаляют верхний слой.
Из упакованного слоя эритроцитов берут пробу, которую разводят водой для определения калия в 260 раз, а для определения натрия – в 26 раз. Пробы сжигают одновременно с калибровочными растворами. Расчет проводят по калибровочному графику.
Кальций
Кальций – основной компонент костной ткани и зубов, участвует в свертывании крови, сокращении мышц, деятельности некоторых эндокринных желез. Всасывание и выведение кальция находятся под контролем гормонов (кальцитонина, паратиреоидного гормона) и активных метаболитов витамина D. 99 % кальция находится в костях, где он вместе с фосфором образует кристаллы гидроксиапатита, составляющего минеральную основу скелета. Несмотря на то что лишь около 1 % фиксированного кальция свободно обменивается с его растворенными фракциями, это существенно влияет на состояние костной ткани и ее механическую прочность.
Около 40 % всего кальция плазмы крови связано с белком, еще примерно 5 % образует комплексы с лимонной, фосфорной или угольной кислотой, остальной кальций находится в физиологически активном, ионизированном состоянии. Доля кальция, связанного с белками (так называемый неультрафильтруемый кальций), зависит от содержания протеина в плазме крови, поэтому четкой количественной связи между общим и ионизированным кальцием не существует, оба параметра имеют клиническое значение.
Во многих физиологических и патологических ситуациях представляет интерес именно содержание ионизированного кальция, но оно может быть определено лишь с помощью специальных кальциевых электродов, аналогичных электродам для определения рН.
Нормальная концентрация кальция в крови – 2,3–2,75 ммоль/л.
В крови кальций находится в трех формах:
1) около 0,9 ммоль/л связано с белками;
2) около 0,25 ммоль/л в комплексе с анионами (цитратом, лактатом, фосфатом, бикарбонатом);
3) 1,25 ммоль/л (около 50 %) в свободной или ионизированной форме.
Наибольшей физиологической активностью обладает ионизированный кальций.
Одним из наиболее распространенных заболеваний, связанных с нарушением обмена кальция, является остеопороз. Это системное заболевание скелета, характеризующееся снижением массы костей и нарушениями в их строении, которые приводят к значительному увеличению хрупкости костей и возможности их переломов. У здоровых людей старше 20–25 лет с возрастом происходит уменьшение костной массы со скоростью 0,5–1 % в год. У женщин в постменопаузе, а также у мужчин и женщин старческого возраста среднее уменьшение массы костей может составить 3–5 % и более в год. Риск развития остеопороза повышают такие факторы, как дефицит эстрогенов (особенно в постменопаузе), недостаток кальция и витамина D в пище, алкоголь, курение, гиподинамия.
При первичном остеопорозе уровень кальция в крови остается, как правило, в норме. При вторичном остеопорозе, который возникает в результате нарушения кальциевого обмена под действием лекарственных веществ и глюкокортикоидов, при нарушениях всасывания кальция в кишечнике, выделения почками, концентрация кальция в крови снижена.
Увеличение концентрации кальция в крови наблюдается при гиперфункции или опухолях паращитовидных желез и повышенном образовании паратиреоидного гормона, а также при различных злокачественных опухолях с метастазами в кости и заболеваниях крови (миеломная болезнь, лимфома, лимфосаркома). Уменьшение продукции паратиреоидного гормона (по разным причинам) сопровождается снижением концентрации кальция в крови.
Предложено много химических методов определения кальция в сыворотке крови и в моче; они основаны главным образом на способности образовывать окрашенные соединения с комплексонами, т. е. веществами, образующими прочные комплексы с металлами. Здесь можно выделить 2 подгруппы – либо общее количество комплекса непосредственно определяется фотометрией, либо окрашенный комплекс используется лишь как индикатор конца титрования. Методы второй группы сейчас практически не находят применения.
Основными методами определения общего кальция являются:
1) метод Вилькинсона – титрование ЭДТА в присутствии мурексида;
2) калориметрический метод с использованием креозолфталеина;
3) калориметрический метод с использованием метил-тимолового голубого;
4) флуореметрический метод с использованием кальцеина;
5) пламенная эмиссия;
6) референсный метод (атомно-абсорбционная спектрофотометрия).
Посуда для выполнения анализа должна быть изготовлена из материала, который не содержит ионы кальция. Проба берется натощак, сыворотку быстро отделяют от сгустка.
Принцип метода
Крезолфталеинкомплексон образует с кальцием в щелочной среде комплекс красно-фиолетового цвета, интенсивность окраски пропорциональна концентрации кальция. В реакционную смесь добавляют 8-оксихинолин, который связывает металлы, мешающие определению, но образует с кальцием менее прочный комплекс, чем крезолфталеинкомплексон.
Необходимые реактивы
1. Боратный буфер: 200 г борной кислоты (Н3ВО3, ортоборная кислота) растворяют при нагревании в 300 мл воды, добавляют 580 мл 5 н КОН, объем доводят водой в мерной колбе до 1 л, при температуре ниже 56 °C из раствора могут выпадать кристаллы.
2. Глицин 2 моль/л: 7,5 г глицина растворяют в 40 мл воды, переносят в мерную колбу и доводят объем до 50 мл, для консервации добавляют 2 капли хлороформа, хранят в холодильнике.
3. 8-оксихинолин (оксин), 1 %-ный раствор: 500 мг препарата растворяют в 50 мл абсолютного спирта.
4. Рабочий буферный раствор: к 300 мл воды добавляют 12,5 мл боратного буфера и 5 мл раствора глицина, перемешивают и устанавливают величину рН в пределах 10,5–10,6 с помощью 5 н КОН, добавляют 50 мл 1%-ного раствора оксихинолина, переносят в мерную колбу вместимостью 500 мл и доводят до метки водой, после чего снова проверяют рН.
5. Крезилфталеинкомплексон, 0,1 %-ный раствор: 10 мг крезолфталеинкомплексона растворяют в 100 мл основного буферного раствора (при хранении в холодильнике реактив стоек не более 2–3 дней); калибровочный раствор. Основной калибровочный раствор, содержащий кальций в концентрации 25 ммоль/л, готовят, растворяя 250 мг кальция карбоната (СаСО