Необходимые реактивы
1. Основной бензидин.
2. Раствор уксусной кислоты 50 %-ный, перед употреблением немного бензидина (на кончике ножа) растворяют в 5 мл уксусной кислоты.
3. Раствор перекиси водорода 3 %-ный или (лучше) пергидроль, разведенный в 10 раз.
Ход исследования
К 3–5 мл мочи добавляют 2–3 капли раствора бензидина в уксусной кислоте и столько же перекиси водорода, перемешивают. Положительная реакция на кровь дает зеленое или сине-зеленое окрашивание в течение первых 2 мин. Окрашивание, наступившее после 2 мин, не учитывается. Вместо перекиси водорода можно пользоваться перекисью бария. 0,025 г основного бензидина и 0,1 г перекиси бария растворяют в 5 мл 50 %-ной уксусной кислоты. Реактив готовят непосредственно перед употреблением.
Ход исследования
К 3–5 мл мочи добавляют 2–4 капли реактива, отмечают изменение цвета в первые 2 мин. В положительном случае появляется сине-зеленое окрашивание.
Бензидиновая проба считается наиболее чувствительной.
Проба с гваяковой смолой (Вебера – Ван-Деена)
Необходимые реактивы
1. Ледяная или 80 %-ная уксусная кислота.
2. Спирт 96 %-ный.
3. Эфир.
4. Свежеприготовленная гваяковая настойка: растертую в порошок гваяковую смолу, взятую на кончике ножа, всыпают в сухую пробирку, приливают 2–6 мл спирта, дают отстояться, для реакции берут отстоявшуюся жидкость без осадка.
5. 3 %-ная перекись водорода.
6. Хлороформ.
Ход исследования
3–5 мл мочи разводят уксусной кислотой и приливают равное количество эфира, тщательно размешивают и сливают в пробирку. Дают отстояться. Эфирный слой переносят в другую чистую пробирку, приливают 15–20 капель гваяковой настойки, 10–15 капель перекиси водорода. При наличии крови тотчас или через 1–3 мин появляется синее или фиолетовое окрашивание.
Упрощенная гваяковая проба
Небольшое количество мочи наносят на бумажный фильтр, положенный на чашку Петри. На него накапывают поровну (по 2–3 капли) уксусной кислоты, гваяковой настойки и перекиси водорода. В присутствии крови появляется сине-зеленое окрашивание.
Пирамидоновая проба
Необходимые реактивы
1. 5 %-ный спиртовой раствор пирамидона (амидопирина).
2. 30 %-ный раствор уксусной кислоты.
3. Перекись водорода.
Ход исследования
Берут равные количества мочи и раствора пирамидона (по 2–3 мл), прибавляют по 10–12 капель уксусной кислоты и перекиси водорода.
В присутствии крови появляется сине-фиолетовое окрашивание. Интенсивность и время появления окраски зависят от количества крови. Отрицательный ответ дается через 2–3 мин.
Для диагноза гемоглобинурии необходимо доказать наличие гемоглобина в моче одной из химических проб.
При отсутствии эритроцитов в осадке (при микроскопическом исследовании) желательно спектроскопически определить природу пигмента.
Необходимые реактивы
1. 5 %-ный раствор соляной кислоты.
2. 2–5 %-ный водный раствор железисто-синеродистого калия (желтая кровяная соль).
Ход исследования
Центрифугируют 15 мл мочи. К осадку прибавляют несколько капель соляной кислоты и несколько капель железисто-синеродистого калия. Делают препарат и микроскопируют. Через 2–5 мин (возможно и раньше) в клетках в положительном случае видны сине-зеленые зернышки. При разрушении клеток гемосидерин лежит свободно.
Гемосидерин в моче встречается главным образом при гемолитических анемиях с внутрисосудистым гемолизом (болезнь Маркиафава – Микели и др.).
Исследование мочи на порфирины связано со значительными техническими трудностями.
Большая часть качественных проб и количественных методов определения основывается на их свойстве флюоресцировать при ультрафиолетовом свете.
Необходимый реактив
Кристаллический сульфат аммония.
Ход исследования
В 5 мл мочи растворяют 2,8 г кристаллического сульфата аммония и фильтруют. Если фильтрат имеет красно-коричневый цвет, то в моче имеется миоглобин (миоглобинурия); если цвет фильтрата нормальный, следовательно, в моче присутствовал гемоглобин, 80 % которого осаждается реактивом.
Миоглобинурии встречаются при тяжелых травмах мышц, электротравмах, тяжелых миозитах и др.
В нормальной моче индикан содержится в незначительном количестве, которое не обнаруживается обычными качественными пробами.
Индиканурия встречается при интенсивном гниении белковых веществ в кишечнике (колит, непроходимость кишечника, рак, абсцесс кишечника, перитонит, запоры и пр.), а также при усиленном распаде белков в организме (опухоль, эмпиема, абсцессы и др.).
Принцип метода
Превращение индикана в индоксил минеральной кислотой и последующее окисление индоксила (хлорным железом или марганцовокислым калием) в индиго синее или красное.
Проба Яффе
Необходимые реактивы
1. Соляная кислота концентрированная.
2. Хлороформ.
3. 2 %-ный раствор марганцовокислого калия.
Ход исследования
8–10 мл мочи смешивают с равным объемом соляной кислоты, приливают 1–2 мл хлороформа и 1–2 капли марганцовокислого калия. Пробирку закрывают и многократно опрокидывают, не взбалтывая. В присутствии индикана хлороформ окрашивается в голубой, синий или розовый цвет. При наличии в моче йодистых солей хлороформ также дает розовую окраску. В таком случае добавляют кристаллик гипосульфита. Исчезновение розовой окраски хлороформа говорит о присутствии йодистых солей. При наличии индикана розовая окраска не исчезает.
Проба Обермейера
Необходимые реактивы
1. 0,2–0,4 г хлорного железа растворяют в 100 мл концентрированной соляной кислоты (реактив нестоек).
2. Хлороформ.
Ход исследования
10 мл мочи смешивают с равным объемом реактива, добавляют 1–2 мл хлороформа и опрокидывают пробирку несколько раз. Синее окрашивание хлороформа указывает на присутствие индикана в моче.
Микроскопическое исследование осадка мочи
Принцип метода
Микроскопическое исследование нативных препаратов мочевого осадка, полученного при центрифугировании мочи.
Необходимое оборудование
1. Центрифуга.
2. Микроскоп.
3. Центрифужные пробирки.
4. Предметные и покровные стекла.
Ход исследования
Приготовление препаратов: в центрифужную пробирку помещают 10 мл утренней мочи после тщательного ее перемешивания. Центрифугируют в течение 5 мин при скорости 2000 об./мин. Затем быстрым наклоном пробирки сливают прозрачный верхний слой, а оставшийся осадок переносят пипеткой с тонко оттянутым концом на середину предметного стекла и покрывают покровным. Надо стараться перенести осадок с минимальным количеством жидкости, чтобы покровное стекло покрывало его полностью. Большая капля расплывается, колеблется, препарат становится многослойным, и это затрудняет микроскопические исследования. Изучение препарата начинают с малого увеличения (8 × 10) для общего обзора, а более детальное изучение препарата с количественной оценкой структур производят при большом увеличении (10 × 40). Если структуры встречаются в каждом поле зрения, то количественную оценку выражают их числом в поле зрения, при небольшом количестве структур, когда их встречают далеко не в каждом поле зрения, – числом в препарате.
Различают организованный и неорганизованный осадок.
Организованный осадок
Эритроциты имеют дискообразную форму, окрашены в характерный желто-зеленый цвет. Включения в цитоплазме отсутствуют. В концентрированной моче кислой реакции эритроциты могут приобретать звездчатую форму. При длительном пребывании эритроцитов в моче низкой относительной плотности они теряют гемоглобин и имеют вид одноконтурных или двухконтурных колец. Деление эритроцитов на измененные и неизмененные не имеет первостепенного значения для решения вопроса об источнике гематурии.
Дифференцировать эритроциты надо с дрожжевыми грибами и кристаллами оксалатов округлой формы. Грибы в отличие от эритроцитов чаще овальной формы, более резко преломляют свет, имеют голубоватый оттенок и почкуются. Оксалаты обычно имеют различную величину и резко преломляют свет. Прибавление к препарату осадка капли 5 %-ной уксусной кислоты приводит к гемолизу эритроцитов, оставляя грибы и оксалаты без изменения.
В норме эритроциты либо не встречаются, либо обнаруживаются единичные в препарате.
Гематурия может быть при поражении паренхимы почки (гломерулонефрите, пиелонефрите, опухолях и др.), при тяжелой физической нагрузке и при поражениях мочевыводящих путей (почечных лоханок, мочеточников, мочевого пузыря, уретры).
Лейкоциты в моче имеют вид небольших зернистых клеток округлой формы. При низкой относительной плотности мочи размер их увеличивается, и в некоторых из них («активных») можно наблюдать броуновское движение гранул. При бактериуриях в щелочной моче лейкоциты довольно быстро разрушаются.
Лейкоциты в моче представлены главным образом нейтрофилами, но иногда можно обнаружить лимфоциты и эозинофилы, которые отличаются обильной, равномерной, крупной, преломляющей свет зернистостью. Активные лейкоциты, так называемые клетки Штернгеймера – Мальбина, можно выявить следующими способами.
I способ
Реактив Штернгеймера – Мальбина.
Раствор I: 3 г генцианового фиолетового, 20 мл этилового спирта, 0,8 г оксалата аммония, 80 мл дистиллированной воды. Раствор II: 0,25 г сафранина, 10 мл этилового спирта, 100 мл дистиллированной воды. Рабочий раствор: 3 части раствора I + 97 частей раствора II. Сохраняется в течение 3 месяцев.