Х = А / 0,9,
где X – число форменных элементов в 1 мкл;
А – число форменных элементов, подсчитанных во всей камере;
0,9 – объем камеры (мкл).
Для камеры Фукса – Розенталя, объем которой 3,2 мкл, Расчет производят по формуле:
Х = А / 3,2.
Количество форменных элементов, выделенных с мочой за сутки, рассчитывают по формуле:
В = Х × 500 × 5 × 24 = Х × 60 000,
если для исследования взять 0,5 мл (500 мкл) из 12-минутной порции мочи, или:
В = Х × 1000 × 5 × 24 = Х × 120 000,
если осадок был обильным и был оставлен 1 мл (1000 мкл),
где X – число форменных элементов в 1 мкл мочи, оставленной для исследования с осадком;
В – число форменных элементов, выделенных за сутки;
500 (или 1000) – количество мочи, мкл, оставленной с осадком из 12-минутной порции мочи. Умножение на 5 и 24 дает Расчет количества клеток за 24 ч.
Нормальные величины суточной экскреции форменных элементов с мочой – до 2 × 106 лейкоцитов, до 1 × 106 эритроцитов и 2 × 104 цилиндров.
Для подсчета цилиндров необходимо просмотреть не менее 4 камер с сеткой Горяева или одну камеру Фукса – Розенталя.
Принцип метода
Определение количества форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров) в 1 мл мочи с помощью счетной камеры.
Специальное оборудование
Микроскоп, счетная камера.
Ход исследования
Берут одноразовую порцию мочи (желательно утреннюю) в середине мочеиспускания, определяют рН (в моче со щелочной реакцией может быть частичный распад клеточных элементов); 5–10 мл мочи центрифугируют при скорости 3500 об./ мин в течение 3 мин, отделяют верхний слой, оставляя вместе с осадком 0,5 мл (500 мкл) мочи при небольшом осадке или 1 мл (1000 мкл) – при большом. Хорошо перемешивают осадок и заполняют счетную камеру. Подсчитывают отдельно лейкоциты, эритроциты и цилиндры во всей сетке камеры.
Расчет
Рассчитывают количество клеток в 1 мкл осадка мочи по формуле Х = А / 0,9 или Х = А / 3,2 (см. выше).
Установив эту величину, рассчитывают число форменных элементов в 1 мл мочи по формуле:
N = х × 500 / V,
если оставлено 0,5 мл (500 мкл) мочи с осадком.
Или же:
N = х × 1000 / V,
если оставлен 1 мл (1000 мкл) мочи с осадком,
где N – число форменных элементов в 1 мл мочи;
х – число форменных элементов в 1 мкл мочи, оставленной вместе с осадком;
500 (или 1000) – объем мочи, мкл, оставленной вместе с осадком;
V – количество мочи, взятой для центрифугирования.
В 1 мл мочи выделяется до 2000 лейкоцитов и до 1000 эритроцитов; цилиндры отсутствуют или обнаруживаются в количестве не более одного на камеру Фукса – Розенталя или на 4 камеры Горяева (до 20 в 1 мл).
Принцип метода
Определение количества форменных элементов, выделенных с мочой за 1 мин, с помощью счетной камеры.
Специальное оборудование
Микроскоп, счетная камера.
Ход исследования
Мочу собирают в течение 3 ч (180 мин). Перемешивают и 10 мл центрифугируют в течение 5 мин при скорости 2000 об./мин.
Надосадочную жидкость отсасывают, оставляя 1 мл, и после перемешивания заполняют камеру. Производят подсчет клеток в 1 мкл осадка мочи по формуле Х = А / 0,9 или Х = А / 3,2 (см. выше). Расчет числа форменных элементов, выделенных за 1 мин, проводят по формуле:
Н = х × 1000 / S × V / t,
где Н – число клеток в минутном объеме мочи;
х – число клеток в 1 мкл осадка;
V – объем мочи за 3 ч;
S – количество мочи, взятое для центрифугирования;
t – время, за которое собрали мочу, в минутах.
За 1 мин в норме с мочой выделяется до 2000 лейкоцитов и до 1000 эритроцитов.
Приведенные методы количественного исследования элементов мочевого осадка могут быть использованы для распознавания скрытой (не обнаруживаемой при ориентировочной микроскопии осадка) лейкоцитурии; для выяснения вопроса о преобладании лейкоцитурии или гематурии и оценки их степени, а также при динамическом наблюдении за этими симптомами для определения эффективности проводимой терапии.
При отрицательных результатах количественного исследования лейкоцитурии у пациентов с подозрением на латентно текущий хронический пиелонефрит повторный подсчет лейкоцитов следует проводить после провокационных проб (наиболее распространен преднизолоновый тест).
Преднизолоновый тест
Принцип метода
Введение гормона активирует воспалительный процесс, и количество лейкоцитов в моче возрастает. Степень лейкоцитурии определяют по методу Нечипоренко до и после внутривенного введения преднизолона.
Специальное оборудование
Микроскоп, счетная камера.
Ход исследования
Утром больной опорожняет мочевой пузырь, и мочу выливают. Через час собирают мочу (контрольная порция), после чего внутривенно вводят 30 мг преднизолона в 10 мл изотонического раствора натрия хлорида.
После вливания с интервалами в 1 ч собирают 3 порции мочи, подлежащие, как контрольная порция, исследованию по Нечипоренко (собирая мочу, берут при мочеиспускании только среднюю порцию).
Еще раз исследуют мочу через 24 ч после вливания преднизолона.
Тест расценивают как положительный, если хоть в одной из порций мочи количество лейкоцитов увеличивается по сравнению с исходным в 2 раза и при этом выявляют активные лейкоциты.
Принцип метода
При проведении пероксидазной реакции цитоплазма лейкоцита приобретает голубую или синюю окраску.
Необходимые реактивы
Краситель – 300 мг диаминофлуорена и 130 мг флюксина В растворяют в 70 мл 95 %-ного этанола. К этой смеси добавляют 11 г ацетата натрия (CH3COONa × 3Н2О), растворенного в 20 мл 0,5 %-ной уксусной кислоты, и 1 мл 3%-ной перекиси водорода. Через 48 ч реактив фильтруют, и он становится годным к употреблению. Хранить его необходимо в темной, химически чистой посуде и периодически фильтровать.
Ход исследования
10 мл свежевыделенной мочи фильтруют через фильтровальную бумагу, после чего на бумагу наносят 3 капли красителя. При содержании в 1 мкл мочи более 10 лейкоцитов на месте нанесения краски появляется темно-синее пятно. Проба считается отрицательной, если пятно красного цвета, и сомнительной, если пятно голубого цвета.
Проба проста и достаточно надежна, ответ можно получить через несколько минут. Экспресс-метод выявления скрытой лейкоцитурии имеет большое значение при профилактических осмотрах, особенно детей в яслях, детских садах и школах.
При положительном значении этой пробы лейкоцитурия выявляется и всеми другими методами, используемыми для ее количественного определения.
Неорганизованный осадок мочи
Неорганизованный осадок мочи состоит из солей, выпавших в осадок в виде кристаллов или аморфных масс. Характер солей зависит от коллоидного состояния мочи, рН и других свойств. При кислой реакции мочи обнаруживаются:
1) мочевая кислота – полиморфные кристаллы (ромбической, шестигранной формы, вид бочонков, брусков и др.), окрашенные в желтый цвет (иногда бесцветные). Кристаллы мочевой кислоты растворяются в щелочах, не растворяются в кислотах, макроскопически в осадке мочи имеют вид золотистого песка. Кристаллы мочевой кислоты обнаруживаются при лихорадочных заболеваниях, сопровождающихся повышенным распадом тканей, при тяжелой физической нагрузке, потреблении только мясной пищи, мочекислом диатезе;
2) ураты – аморфные мочекислые соли. Располагаются кучками желтовато-коричневатого цвета. Растворяются при нагревании и при добавлении щелочей. При действии кислот (уксусной или соляной) постепенно превращаются в бесцветные кристаллы мочевой кислоты ромбической формы. Макроскопически ураты после центрифугирования имеют вид плотного кирпично-розового осадка. В таких случаях необходимо освободиться от солей, так как они мешают микроскопическому исследованию. С этой целью используют реактив Селена (4 г буры и 4 г борной кислоты растворяют в 100 мл дистиллированной воды). В центрифужную пробирку после удаления надосадочной мочи наливают реактив Селена, смешивают, центрифугируют вновь и микроскопируют осадок. Ураты в моче появляются при употреблении в пищу продуктов, содержащих нуклеиновые кислоты, а также при повышенном распаде клеток при лейкозах, опухолях;
3) щавелевокислая известь (оксалаты) встречается в кислой моче, но может быть и в моче со щелочной реакцией. Кристаллы имеют форму октаэдров («почтовых конвертов»), а также круглую или овальную форму. Растворяются в соляной кислоте, не растворяются в щелочи и уксусной кислоте. Выпадение солей щавелевокислой извести происходит при употреблении с пищей некоторых фруктов и овощей;
4) углекислый кальций обнаруживается в форме мелких шариков. Растворяется в кислотах, выделяя углекислоту.
При щелочной реакции мочи обнаруживают:
1) кислый мочекислый аммоний (в моче детей может быть при кислой реакции). Имеет форму гирь и шаров, часто с отростками. Растворяется при нагревании и в щелочах. При добавлении кислот (соляной или уксусной) образуются бесцветные ромбические кристаллы мочевой кислоты;