Тест положительный при наследственной или приобретенной цистинурии или гомоцистинурии, в этом случае окраска остается более 5 мин.
Обнаружение пролина и других аминокислот
Пролинурия возможна при патологии почек и как симптом наследственного нарушения обмена.
Принцип метода
Изатин образует с некоторыми аминокислотами специфически окрашенные соединения.
Необходимые реактивы
1. Изатин.
2. Ацетон.
3. Раствор изатина в ацетоне 0,2 г/л (раствор хранят в холодильнике при температуре 4 °C.
4. Соляная кислота 1 моль/л.
Ход исследования
Фильтровальную бумагу пропитывают раствором изатина в ацетоне и высушивают. Затем наносят на нее одну каплю мочи и высушивают при 100 °C в течение 10 мин, смачивают раствором соляной кислоты и промывают водой.
Сине-серую окраску дает повышенное содержание фенилаланина, коричневую – триптофан, пурпурную – смесь различных аминокислот, а появление синей окраски в виде ободка свидетельствует о присутствии в моче свободного пролина (не менее 0,1 мг/мл). Можно сравнивать интенсивность окраски с цветной шкалой. Для приготовления стандартных растворов, содержащих от 0,1 до 0,5 мг/мл соответствующих аминокислот, используют растворы аминокислот с исходной концентрацией 0,5 мг соответствующей аминокислоты в 1 мл раствора.
Обнаружение кетокислот (проба с треххлористым железом)
Кетокислоты в большом количестве выделяются с мочой при нарушении различных обменных процессов, в частности цикла Кребса; производные фенотиазида или салицилата – при отравлениях ими; 3-оксиантраниловая кислота – при нарушениях обмена триптофана.
Принцип метода
Треххлористое железо в присутствии НСl дает с кетокислотами специфически окрашенные соединения.
Необходимые реактивы
1. Железо треххлористое (FeCl3 × 6Н2О), 10 %-ный раствор.
2. НСl, 10 %-ный раствор.
3. Аммиак водный концентрированный.
4. Магния хлорид (MgCl2 × 6Н2О): к 11 г хлорида магния прибавляют 20 мл концентрированного водного аммиака и объем доводят водой до 1 л.
Ход исследования
Вариант I – к 0,5 мл мочи добавляют 0,25 мл раствора треххлористого железа, при положительной реакции появляется темно-зеленый осадок.
Вариант II – для связывания фосфатов, мешающих реакции, к 4 мл мочи прибавляют 1 мл раствора хлорида магния, перемешивают и через 5 мин фильтруют. К фильтрату добавляют по 2 капли раствора соляной кислоты и раствора треххлористого железа; в течение 5 мин наблюдают развитие окраски.
О наличии кетокислот судят по характеру окраски, однако следует иметь в виду, что окраска может развиваться и за счет других соединений (табл. 37).
Таблица 37
Цветная реакция различных соединений с треххлористым железом
Обнаружение кетокислот по реакции с 2,4-динитрофенилгидразином
Принцип метода
Кетокислоты образуют с 2,4-динитрофенилгидразином окрашенные гидразоны.
Необходимые реактивы
1. НСl, 2 моль/л.
2. 2,4-динитрофенилгидразин (2,4-ДНФГ): 2 г 2,4-ДНФГ растворяют в 1 л 2 моль/л НСl.
3. Диэтиловый эфир.
4. Натрия карбонат (NaО2СО3), 100 г/л.
Ход исследования
Смешивают 1 мл раствора 2,4-ДНФГ и 0,25 мл мочи. Через 10 мин прибавляют 1,25 мл диэтилового эфира и перемешивают, эфирный слой отсасывают и переносят в пробирку, куда добавляют равный объем раствора натрия карбоната. Содержимое пробирки перемешивают.
При положительной пробе развивается окраска от желтой до оранжево-коричневой. В норме проба отрицательная, окраска не развивается.
Обнаружение гомогентизиновой кислоты
Принцип метода
В щелочной среде гомогентизиновая кислота окисляется с образованием соединений сине-фиолетового цвета.
Необходимый реактив
Едкий натр, 100 г/л.
Ход исследования
К 0,5 мл мочи прибавляют 3–4 капли раствора едкого натра, результат оценивают через 1–2 мин.
При положительной реакции развивается сине-фиолетовое окрашивание, при отрицательной окраска не возникает.
Обнаружение индикана
Принцип метода
Превращение индикана в индоксил после гидролиза эфирной связи сильной минеральной кислотой и последующее окисление индоксила треххлористым железом с образованием окрашенного соединения.
Необходимые реактивы
1. Свинца ацетат (СН3СОО)Рb × 3Н2О), 100 г/л раствора.
2. НСl концентрированная.
3. Железо треххлористое (FeCl3 × 6Н2О).
4. Реактив Обермейра: 0,4 г треххлористого железа растворяют в 100 мл концентрированной НСl.
5. Хлороформ.
6. Натрия тиосульфат (Na2S2O3 × 5H2O), 200 г/л раствора.
Ход исследования
К 4 мл мочи прибавляют 0,4 мл раствора ацетата свинца для осаждения желчных пигментов, солей и других веществ, мешающих реакции.
Фильтруют, 1–2 мл фильтрата смешивают с равным объемом реактива Обермейра, прибавляют 0,5–1 мл хлороформа и осторожно перемешивают.
Если слой хлороформа окрашивается в синий или красный цвет, его отсасывают и добавляют к нему 2–3 капли тиосульфата натрия.
При положительной реакции окраска хлороформа не исчезает после добавления тиосульфата натрия. В норме реакция отрицательная.
Обнаружение фруктозы (проба Селиванова)
Принцип метода
При нагревании фруктозы с резорцином в кислой среде образуются соединения, окрашенные в красный цвет.
Необходимые реактивы
1. НСl, 1 моль/л.
2. Резорцин: 5 г в 1 л, 1 моль/л раствора НСl.
Ход исследования
К 2 мл мочи приливают 1 мл раствора резорцина и нагревают до закипания.
При положительной пробе развивается интенсивное красное окрашивание. В норме окраска не появляется.
Оценку пробы проводят в момент закипания, так как при длительном кипении окраска может развиться при наличии глюкозы. Пищевая нагрузка медом и фруктами может дать положительную пробу.
Обнаружение лактозы и мальтозы (проба Велька)
Принцип метода
Лактоза и мальтоза в щелочной среде при нагревании с аммиаком образуют окрашенные соединения.
Необходимые реактивы
1. Аммиак водный концентрированный.
2. Калий едкий, 200 г/л раствора.
Ход исследования
К 5 мл мочи приливают 2,5 мл аммиака и 0,2 мл раствора едкого калия. Нагревают на водяной бане в течение 30 мин при температуре 60 °C.
При положительной реакции на лактозу появляется коричневая окраска, а при наличии мальтозы – красная окраска. В норме окраска не развивается.
Обнаружение пентоз (проба Биаля)
Принцип метода
Пентозы с орцином и треххлористым железом при нагревании в кислой среде образуют окрашенные соединения.
Необходимые реактивы
1. 5-метилрезорцин (орцин).
2. НСl концентрированная.
3. Железо треххлористое (FeCl3 × 6Н2О), 100 г/л раствора.
4. Реактив Биаля: 1 г орцина растворяют в 500 мл соляной кислоты и добавляют 1 мл раствора треххлористого железа.
Ход исследования
Нагревают 1 мл мочи до кипения с 5 мл реактива Биаля.
При положительной пробе появляется яркая желто-зеленая окраска. В норме проба отрицательная.
Обнаружение глюкозы, фруктозы, пентозы, лактозы и мальтозы в моче может быть результатом врожденных ферментопатий, а лактоза и мальтоза могут быть обнаружены при нарушении их гидролиза в тонкой кишке.
Обнаружение гликозоаминогликанов (проба с метилтриметил-аммония бромидом)
Принцип метода
Метилтриметиламмония бромид (ЦТАБ) с гликозамино-гликанами образует в кислой среде белый осадок.
Необходимые реактивы
1. Лимонная кислота.
2. Едкий натр.
3. Цитратный буфер, 1 ммоль/л, рН 5,7: в небольшом количестве воды растворяют 210 г лимонной кислоты, добавляют 120 г едкого натра, растворяют, охлаждают и доливают водой до 1 л.
4. Раствор ЦТАБ, 25 г в 1 л цитратного буфера.
Ход исследования
К 5 мл мочи приливают 1 мл раствора ЦТАБ и в течение 30 мин наблюдают образование осадка. Пробу проводят при комнатной температуре, для исследования берут свежевыделенную мочу.
Проба считается положительной при образовании осадка. В норме проба отрицательная. Следует учитывать, что проба дает 40 % ложноположительных результатов.
Определение кальция (проба Сулковича)
Высокое содержание кальция в моче может быть при гипервитаминозе D и гиперпаратиреозе.
Принцип метода
Ионы кальция со щавелевой кислотой образуют нерастворимую щавелевокислую соль.
Необходимые реактивы
1. Щавелевая кислота.
2. Аммония оксалат.
3. Уксусная кислота ледяная.
4. Реактив Сулковича: в 50 мл дистиллированной воды растворяют по 2,5 г щавелевой кислоты и оксалата аммония, добавляют 5 мл ледяной уксусной кислоты и доводят объем раствора до 150 мл.
Ход исследования
Смешивают по 0,5 мл мочи и реактива Сулковича. Через 1–2 мин оценивают степень помутнения.
Степень помутнения оценивают визуально:
– 0 – отсутствие помутнения;
– 1 – слабое помутнение;
– 2 – умеренное помутнение;
– 3 – значительное помутнение;
– 4 – резко выраженное помутнение.
О повышенном содержании кальция в моче свидетельствуют 3 и 4-я степени помутнения.
После выявления положительных результатов описанных тестов больной нуждается в тщательном обследовании с помощью точных количественных методов в специализированных учреждениях.
Бактериологическое и бактериоскопическое исследования мочи
Микробиологическое исследование мочи производят при воспалительных заболеваниях мочеиспускательных путей.