Бензидиновая проба. Применяются следующие реактивы: 1 %-ный раствор бензидина в 50 %-ной уксусной кислоте (при хранении в посуде из темного стекла годен в течение нескольких дней с условием ежедневного контроля), 3 %-ный раствор Н2О2.
Неразведенный кал тонким слоем наносят на предметное стекло. Мазок кладут в чашку Петри, лежащую на белом фоне, и наносят на него 2–3 капли раствора бензидина и столько же перекиси водорода. При положительной реакции появляется зеленое или синее окрашивание. Интенсивность окраски пропорциональна количеству крови в испражнениях. Если окраска не развивается или появляется позже 2 мин, то проба считается отрицательной. Бензидиновая проба является наиболее чувствительной и дает положительный результат в разведении крови 1: 100 тыс. – 1: 250 тыс. В настоящее время этот тест практически не используется, так как дает много ложноположительных результатов и выявляет кровопотери, превышающие 15 мл в сутки.
В клинической практике часто применяется гваяковая проба.
Гваяковая проба. Применяются следующие реактивы: 2 %-ная спиртовая настойка гваяковой смолы, ледяная уксусная кислота, 3 %-ный раствор Н2О2.
На предметное стекло, помещенное в чашку Петри, кладут кусок фильтровальной бумаги, на которую наносят небольшое количество кала в виде мазка. На кал капают 2–3 капли ледяной уксусной кислоты, настойки гваяковой смолы и перекиси водорода. В присутствии крови появляется сине-зеленое или фиолетовое окрашивание. Проба с гваяковой смолой дает положительный результат с разведениями крови 1: 50 тыс. В настоящее время разработаны тесты, в которых гваяковый реагент нанесен на пластмассовую полоску. Это привело к возможности стадартизировать проведение исследований и диагностировать мелкие кровотечения. Тест становится положительным при концентрации Нb в кале более 2 мг в 1 грамме. Гваяковый тест выявляет скрытую кровь при раке толстой кишки, колоноректальном раке, полипах толстой кишки.
Пирамидоновая проба. Применяются следующие реактивы: 5 %-ный спиртовой раствор амидопирина (пирамидона), 3 %– ный раствор уксусной кислоты, 3 %-ный раствор Н2О2.
Небольшой кусочек кала растирают с 4–5 мл воды и фильтруют. К фильтрату добавляют равный объем раствора амидопирина и по 10–12 капель уксусной кислоты и перекиси водорода. В присутствии крови появляется сине-фиолетовое окрашивание. Если через 2 мин окраска не появилась, то проба считается отрицательной. Проба с амидопирином по чувствительности стоит между описанными выше.
Экспресс-тесты. Фирмы «Germed» (ФРГ), «Roham Pharma» (Чехия), «Smith Klein» (США) выпускают бумажные тесты для определения скрытой крови в испражнениях, которые основаны на пробе с гваяковой смолой.
Испражнения наносят на пропитанную гваяковой смолой фильтровальную бумагу, укрепленную на дне небольшого окошка, прорезанного в картонной пластине, и закрывают створкой. С противоположной стороны также имеется створка, которую открывают непосредственно при исследовании, и на фильтровальную бумагу, которая уже пропитана испражнениями, наносят 2–3 капли реактива, в который входят кислота и перекись водорода. При наличии крови на фильтровальной бумаге развивается сине-зеленое окрашивание. Определение крови подобным тестом не ускоряет исследования, но позволяет проводить его у постели больного и значительно упрощает транспортировку испражнений при необходимости исследования только крови.
В последние годы для ранней диагностики рака толстой кишки применяются иммунохимические тесты с использованием специфических антител к гемоглобину человека (наборы типа «Гемоселект» и др.). Они положительные в 97 % случаев рака толстой кишки и 60 % при аденоматозе (при полипах размером более 1 см).
У здорового человека выводится с калом от 250 до 320 мг стеркобилина в сутки. Он придает калу определенную окраску, при его отсутствии кал обецвечен.
Унифицированный метод с двухлористой ртутью (проба Шмидта)
В результате реакции стеркобилина с двухлористой ртутью образуется соединение, имеющее розовое окрашивание. Применяются следующие реактивы: раствор двухлористой ртути (HgCl2 – хлорид ртути, сумма), 70 г/л раствора.
Растворяют при кипячении, после охлаждения фильтруют.
Комочек кала величиной с лесной орех растирают в фарфоровой чашечке или пробирке с 3–4 мл раствора двухлористой ртути, закрывают крышкой или пробкой и оставляют при комнатной температуре в вытяжном шкафу на сутки. Контрольную пробу ставят так же, как опытную, но вместо двухлористой ртути берут воду. В присутствии стеркобилина в опытной пробе появляется розовое окрашивание. Оценку результатов можно провести немедленно, если подогревать пробирки с опытной и контрольными пробами на пламени горелки. При наличии билирубина образуется зеленое окрашивание. В норме реакция положительная.
Метод с применением треххлористого железа
Необходимые реактивы
1. Реактив Фуше – раствор треххлористого железа (FeCl3) 1: 5 мл воды.
2. Концентрированная соляная кислота.
В стеклянный сосуд помещают 1 г фекальных масс, хорошо смешанных с 10 мл дистиллированной воды. Затем 5 мл из этой эмульсии фекальных масс смешивают с 5 мл концентрированной соляной кислоты и нагревают в течение 5 мин до 50 °C. После охлаждения в проточной воде к этой смеси добавляют 2–3 капли треххлористого железа. Реакция может регистрироваться немедленно – в присутствии стеркобилина появляется красная окраска.
Метод с применением ацетата цинка
Необходимый реактив
Насыщенный раствор ацетата цинка (10 г ацетата цинка в 100 мл этилового спирта).
В пробирке смешивают до полной однородности 2–3 г фекальных масс и 100 мл насыщенного спиртового раствора ацетата цинка. В эту смесь добавляют 2–4 капли спиртового раствора йода и затем смесь фильтруют. Спустя 24 ч реакция регистрируется: в присутствии желчных пигментов фильтрат приобретает зеленую окраску.
У взрослых людей неизмененный билирубин в кале может появиться при ускоренной перистальтике (билирубин не успевает восстановиться) и при подавлении жизнедеятельности бактерий кишечника приемом больших доз антибиотиков и сульфаниламидов. Нарушение поступления билирубина в кишечник при заболеваниях печени или механическом препятствии оттоку желчи в результате закупорки или сдавления общего желчного протока приводит к снижению или полному отсутствию стеркобилина в кале, что отражается на окраске испражнений. Полное отсутствие стеркобилина можно установить только при химическом исследовании. Усиленное желчеотделение, повышенный распад эритроцитов приводят к увеличению стеркобилина в кале. Установить это можно, исследуя количество стеркобилина, выделенное с каловыми массами за сутки.
Формалин с солями аммония образует гексаметилентетрамин; освобождаемые кислые радикалы солей аммония оттитровывают 0,1 %-ным раствором щелочи в присутствии фенолфталеина.
Необходимые реактивы
1. 30 %-ный раствор хлорида железа (FeCl3).
2. 1–2 %-ный спиртовой раствор фенолфталеина.
3. Гидроксид кальция [Са(ОН)2] в порошке.
4. 0,1 %-ная HCl.
5. Формалин, разведенный 1: 2 и нейтрализованный 0,1 %-ным раствором гидроксида натрия (щелочи).
Растирают 10 г кала, постепенно добавляя 90 мл дистиллированной воды. Затем переливают в колбу и при встряхивании добавляют 2 мл 30 %-ного хлорида железа. Спустя 10 мин вносят 25 капель раствора фенолфталеина. В эту смесь добавляют 10 мл дистиллированной воды, в которой растворены 2 г гидроксида кальция, до появления красного окрашивания смеси. Через 10 мин смесь фильтруют и доводят до 100 мл дистиллированной водой. Смесь должна быть прозрачной; мутность появляется при излишке гидроксида кальция. 25 мл фильтрата выливают в колбу и нейтрализуют 0,1 %-ной HCl до бледно-розовой окраски. Затем добавляют 5 мл формалина, после чего фильтрат обесцвечивается. Далее проводят тестирование 0,1 %-ным раствором гидроксида Na до появления бледно-розовой окраски. Количество щелочи, прошедшей тестирование, умножают на 4, получая количество аммиака на 10 г кала.
В нормальных условиях количество аммиака в кале (в 10 г) соответствует приблизительно 4 мл 0,1 %-ного раствора гидрата натрия. Количество аммиака в кале отражает интенсивность гниения в толстом кишечнике. Практически пищевой белок расщепляется и всасывается в тонкой кишке, а гнилостному распаду подвергается чаще белок, выделяемый стенкой толстого кишечника. Следовательно, увеличение аммиака в кале говорит о гиперсекреции и воспалительной экссудации в толстых кишках, но так как распад белка до аммиака требует длительного времени, то при учащенной дефекации его количество в испражнениях даже при колитах может быть нормальным.
Муцин слизи осаждается уксусной кислотой. Применяются следующие реактивы: 5 %-ный водный раствор ледяной уксусной кислоты. В пробирку к 2,5 мл 10 %-ной водной суспензии каловых масс приливают 7,2 мл 5%-ной уксусной кислоты. Появление через 20 мин хлопьев и просветления жидкости говорит о присутствии нерастворимой слизи.
Нерастворимая слизь в кале свидетельствует о раздражении или воспалении верхних отделов толстого кишечника.
Бактериологические исследования
О бактериальной флоре ободочной кишки может быть получено достаточно сведений при помощи бактериального исследования фекальных масс. Если речь идет о больном, то в соответствующих фекальных массах могут быть обнаружены в избытке и возбудители, локализованные также и в более высоко расположенных сегментах кишечника.
Бактериальная флора стула является очень разнообразной и богатой. Согласно наблюдениям различных авторов первое место в составе флоры фекальных масс занимают