Карликовый цепень (Hymenolepis nana). Яйцо эллипсовидной формы. Оболочка бесцветная с онкосферой внутри. Онкосфера имеет 3 слоя оболочки темно-коричневого цвета. Хорошо заметны 3 пары эмбриональных крючьев. Размер 40 × 50 мкм.
Власоглав (Trichocephalus trichiurus). Яйцо имеет форму лимона. Оболочка толстая, многослойная, золотисто-желтого или коричневого цвета. На полюсах имеются бесцветные пробковидные образования. Размер 50–54 × 22–23 мкм.
Анкилостома (Ancylostoma duodenale). Яйцо овальной формы с закругленными полюсами. Оболочка тонкая, прозрачная, бесцветная. В свежеотложенном яйце хорошо различимы 4 бластомера. Размер 54–70 × 36–40 мкм.
Аскарида (Ascaris lumbricoides). Оплодотворенное яйцо овальной формы, имеет толстую, многослойную оболочку. Наружная оболочка белковая, крупнобугристая, желто-коричневого цвета. Некоторые яйца бывают лишены белковой оболочки.
Яйцо бесцветное или с серо-зеленым оттенком. Размер 50–106 × 40–50 мкм.
Острица (Enterobius vermicularis). Яйцо овальное, асимметричной формы, одна сторона выпуклая, другая утолщена. Оболочка гладкая, бесцветная, многослойная. Внутри яйца зародыш на разных стадиях развития. Размер 50–60 × 20–30 мкм.
Таблица 41
Сравнительная характеристика яиц трематод
Таблица 42
Сравнительные данные о ленточных червях
Таблица 43
Сравнительная характеристика яиц нематод
Кроме метода мазков, применяют более сложные, но и более эффективные методы – методы обогащения, основанные на концентрации яиц в препаратах. Эти методы условно можно разделить на 2 большие группы:
1) концентрация яиц на поверхности жидкости (методы флотации, всплывания);
2) концентрация яиц в осадке (методы осаждения, седиментации).
Метод Калантарян (с флотационным раствором). Основан на том, что в жидкости с высокой относительной плотностью яйца гельминтов как более легкие всплывают на поверхность, где и концентрируются.
Для этого используется раствор Калантарян (1 кг нитрата натрия растворяют в 1 л воды; смесь кипятят до образования пленки, остужают; относительная плотность раствора 1,38).
В химическом стакане тщательно размешивают стеклянной палочкой 5–10 г фекалий со 100–200 мл флотационного раствора. Сразу после размешивания удаляют всплывшие на поверхность крупные частицы. Стаканчик покрывают предметным стеклом так, чтобы оно соприкасалось с поверхностью жидкости.
Если жидкости мало, ее следует долить до полного соприкосновения смеси с предметным стеклом. Оставляют для всплытия яиц на 20–30 мин, после чего предметное стекло снимают, кладут под микроскоп и просматривают без покровного стекла.
Хорошо всплывают все яйца, в том числе трематод, крупных цестод, а также неоплодотворенные яйца аскарид, яйца власоглава.
Метод Фюллеборна позволяет исследовать большое количество материала и широко используется.
В небольшую баночку (обычно мазевую) помещают 5 г фекалий и тщательно размешивают с 20-кратным количеством насыщенного раствора хлорида натрия, добавляя его при помешивании небольшими порциями. Всплывшие на поверхность крупные частицы удаляют кусочком бумаги или картона, баночку до краев наполняют раствором хлорида натрия и покрывают предметным стеклом так, чтобы нижняя поверхность соприкасалась с жидкостью. Баночку оставляют стоять на 45–90 мин (в течение этого срока яйца всплывают и держатся на поверхности смеси), затем предметное стекло осторожно поднимают, быстро переворачивают и приставшую пленку микроскопируют под малым увеличением без покровного стекла.
Методом Фюллеборна хорошо выявляются яйца цепня карликового и всех нематод, за исключением неоплодотворенных яиц аскарид. Так как яйца трематод, большинства цестод всплывают, нужно исследовать и осадок со дна баночки. Препараты из осадка малопрозрачны, поэтому для просветления можно добавить каплю глицерина.
Метод Красильникова (с применением детергентов). Под действием поверхностно-активных веществ, входящих в состав детергентов (стиральных порошков), яйца гельминтов освобождаются от фекальных масс и концентрируются в осадке.
Для этого используют 1 %-ный раствор стирального порошка «Лотос» (порошок высушивают в сушильном шкафу при 100 °C в течение 1–2 ч; 10 г сухого порошка растворяют в 1 л водопроводной воды).
В центрифужную пробирку помещают комочек кала и приливают раствор детергента. Соотношение кала к жидкости 1: 10. Хорошо перемешивают их до образования суспензии. Через 30 мин содержимое пробирки встряхивают 1–2 мин и центрифугируют 5 мин при 1500 об./мин. Из осадка готовят 2 препарата на одном стекле.
В практике работы лаборатории пользуются и другим способом. В этом случае жидкость не подвергается центрифугированию, а отстаивается в течение 24 ч для образования осадка, из которого также готовят мазки для микроскопирования.
Метод закручивания (по Шульману) очень прост, более эффективен, чем метод нативного мазка, однако ограничиваться им при исследовании на гельминты нельзя. Он служит дополнением к методам концентрации яиц и личинок.
В небольшой баночке высотой 6–7 см тщательно размешивают 2–3 г испражнений с 3–5-кратным количеством воды или изотонического раствора хлорида натрия. После этого стеклянной палочкой делают быстрые круговые движения (закручивание) в течение 1–2 мин. При круговом движении яйца и личинки собираются у конца стеклянной палочки. По окончании закручивания палочку с каплей взвеси быстро вынимают, каплю помещают на предметное стекло, а затем микроскопируют.
Метод Бермана применяется для выявления личинок гельминтов (угрицы). Полученный от больного кал (лучше свежевыделенный) в количестве 5 г помещают на мелкую металлическую сетку (удобна цедилка для молока) в стеклянную воронку, закрепленную в штативе. На нижний конец воронки надевают резиновую трубку с зажимом (аппарат Бермана). Сетку (цедилку) приподнимают и в воронку наливают нагретую до 50 °C воду таким образом, чтобы нижняя часть сетки была погружена в воду. Личинки из кала в связи с термотропностью активно выползают в теплую воду и скапливаются в нижней части воронки. Через 2–4 ч зажим открывают, жидкость выпускают в одну или две центрифужные пробирки. Цетрифугируют в течение 2–3 мин, после чего быстро сливают поверхностный слой, а осадок помещают на предметное стекло и исследуют под микроскопом.
Для диагностики энтеробиоза применяются специальные методы взятия материала: соскоб шпателем и снятие яиц липкой полиэтиленовой лентой. Применение этих методов основано на биологической особенности самок остриц откладывать яйца на перианальные складки кожи при выползании ночью из кишечника. В кале яйца, как правило, не обнаруживаются. Материал для исследования получают утром до дефекации или вечером, после 1,5 ч пребывания в постели.
Метод снятия яиц липкой лентой. Для этого берут кусок липкой ленты шириной около 2 см и длиной около 10 см. Прикладывают липким слоем середину ленты к перианальным складкам кожи, затем приклеивают ее на предметное стекло. В лаборатории ленту отклеивают, вносят под нее на большом протяжении 1–2 капли вазелинового масла и просматривают под микроскопом.
Метод соскоба шпателем. Широко применяется метод перианального соскоба деревянным шпателем. Шпатель (или плоско заточенную спичку) смачивают 50 %-ным раствором глицерина.
Осторожно производят соскабливание с поверхности складок в окружности ануса и нижнего отдела прямой кишки. Затем материал тщательно соскабливают со спички краем покровного стекла, помещают его на предметное стекло в каплю 50 %-ного раствора глицерина. Накрывают тем же покровным стеклом и микроскопируют. Шпатель после однократного пользования сжигают. Соскоб с перианальных складок производят троекратно.
Количественные методы используют для суждения об интенсивности инвазии путем определения числа яиц в 1 мл фекалий; применяют при оценке эффективности противоглистных препаратов и других методов лечения, а также результатов массовых противоглистных мероприятий. Число яиц подсчитывают до и после проведения соответствующих мероприятий.
Количественные методы применяются при тех гельминтозах, возбудители которых откладывают яйца в кишечнике более или менее равномерно (аскаридозе, трихоцефалезе, анкилостомидозе, трематодозе).
При цестодозах эти методы не используются, так как яйца не откладываются, а выделяются лишь при распаде или разрыве зрелых члеников. Количественные методы не применяются при энтеробиозе, так как острицы откладывают яйца в перианальной области.
Наиболее распространенным из количественных методов является метод Стола. В мерный цилиндр или специальную колбочку наливают децинормальный раствор едкого натра до метки 56 мл, затем прибавляют испражнения до тех пор, пока уровень жидкости не достигнет отметки 60 мл (приблизительно 4 г фекалий). Смесь тщательно взбалтывают со стеклянными бусами, закрыв сосуд пробкой. Тотчас после взбалтывания набирают градуированной пипеткой 0,075 мл смеси, которая содержит 0,005 мл кала. Содержимое пипетки переносят на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом (сосчитывают яйца во всем препарате).
Чтобы подсчитать количество яиц в 1 мл (1 г) фекалий, нужно число яиц умножить на 200. Например, если в 0,075 мл смеси, т. е. в 0,005 мл испражнений, обнаружено 5 яиц, то в 1 мл фекалий будет 1000 яиц.
Консервирование кала при исследовании на яйца гельминтов проводят с применением жидкости Шеляпиной (водный раствор формалина и глицерина), жидкости Красильникова (1 %-ный раствор стирального порошка «Лотос»), 3 %-ного раствора хлористоводородистой кислоты.