lanugo), капли жира.
Определение «чешуек»
Каплю осадка наносят на стекло и покрывают покровным стеклом. Тонким концом пипетки с баллоном впускают под покровное стекло каплю 1 %-ного водного раствора эозина, который равномерно прокрашивает препарат. Избыток краски отсасывают фильтровальной бумагой с противоположного края покровного стекла. Затем точно таким же путем препарат промывают водой. При микроскопии на розовом фоне обнаруживают неокрашенные, хорошо контурированные безъядерные клетки кожи плода («чешуйки»), которые часто лежат скоплениями. «Чешуйки» не воспринимают окраску эозином, так как они покрыты первородной смазкой (жиром). Клетки влагалищного эпителия красятся в ярко-розовый цвет; ядра хорошо выражены.
Определение жира
К капле осадка прибавляют каплю раствора Судана 3, покрывают покровным стеклом. При микроскопии видны капли жира, окрашенные в оранжевый цвет. При определении жира в околоплодных водах требуется тщательно обработанная посуда (обезжиренная).
Обнаружение пушковых волос (lanugo) производят в нативном препарате. Определение «чешуек» дает 99 % положительных находок при исследовании раннего отхождения околоплодных вод, обнаружение капель жира – в 100 %, lanugo выявляются редко.
Исследование на гонококки
Взятие материала
У женщин отделяемое берут одновременно из уретры, влагалища и шейки матки. Выделения из бартолиниевых желез исследуют только по клиническим показаниям. Иногда берут выделения из прямой кишки: спустя 3–4 ч после опорожнения кишечника делают смыв физиологическим раствором, который центрифугируют, после чего исследуют осадок.
У мужчин берут отделяемое из уретры (утром до первого мочеиспускания), секрет простаты, полученный после массажа железы, или мочу, выделенную после массажа. Кроме того, исследуют мочу, собранную утром после длительного воздержания от мочеиспускания. У девочек отделяемое берут из уретры, влагалища и прямой кишки (промывные воды).
Из полученного материала готовят тонкие мазки. Если материалом для исследования служит моча, то препараты готовят из осадка после центрифугирования.
Окраска препаратов
Высушенные и фиксированные над пламенем препараты (делают, как правило, не меньше двух препаратов) окрашивают по Граму и метиленовым синим.
Окраска метиленовым синим
Фиксированные препараты заливают 0,5–1 %-ным водным раствором метиленового синего на 1 мин; промывают водой и высушивают.
Окраска по Граму
Окраска по Граму требует особой тщательности, так как при недостаточном обесцвечивании гонококки могут сохранить окраску Грама, при слишком длительном обесцвечивании окраску могут терять другие грамположительные кокки (стафилококки, стрептококки). Это может привести к ошибочным результатам. Для цитологического исследования препараты окрашивают по Романовскому (при этом нередко обнаруживают эозинофилы, особенно в период выздоровления).
При исследовании под микроскопом гонококки имеют форму кокков, парно расположенных. Поверхности, обращенные друг к другу, несколько уплощены. Гонококки часто располагаются кучками, в острых случаях заболевания находятся главным образом в лейкоцитах. При окраске по Граму обесцвечиваются и окрашиваются в розовый цвет (грамотрицательно).
Бактериоскопический метод, хотя и является основным для выявления гонококков, имеет ряд недостатков: сравнительно редкое обнаружение гонококков и трудность их дифференцирования от другой кокковой флоры, особенно в случаях, когда проводилось лечение. Однократный отрицательный результат не доказателен, поэтому требуются повторные исследования.
При исследовании мазков от больных гонореей в основном наблюдается бактериоскопическая картина 3 видов.
1. Лейкоциты покрывают все поле зрения; часто гонококки расположены внутриклеточно. Имеются также гонококки, лежащие свободно. Другие микроорганизмы при этом не обнаруживаются.
2. Клеточная картина та же самая, но гонококков нет. Посторонняя флора отсутствует. Такая картина часто наблюдается при хронической гонорее.
3. Небольшое количество дегенерированных лейкоцитов и обильная посторонняя флора, появление которой говорит об улучшении течения процесса.
Исследование отделяемого молочных желез
Отличие женского молока от коровьего (проба Умикова)
Принцип метода
При нагревании женского молока до 60 °C аммиаком получается фиолетовое окрашивание.
Необходимый реактив
10 %-ный раствор аммиака.
Ход исследования
Молоко из молочной железы получают путем сцеживания руками или аппаратом в любое время между кормлениями ребенка, однако лучше сцедить небольшое количество молока до кормления и после него, а затем обе порции смешать. Лучшее время для взятия молока – 9–10 ч.
В пробирку наливают 2 мл молока, добавляют 2 мл раствора аммиака. Затем пробирку встряхивают. Через несколько минут исследуемое молоко окрашивается в фиолетовый цвет.
Окраска исследуемого молока в фиолетовый цвет указывает на принадлежность его женщине. Реакция особенно хорошо выражена в позднем лактационном периоде.
Определение удельного веса
Исследуемое молоко наливают в стеклянный цилиндр и погружают в него ареометр. Цилиндр в строго вертикальном положении держат против света. Мениск молока указывает на шкале ареометра цифру удельного веса. Он колеблется между 1,026–1,036 при температуре 15 °C. Если температура воздуха выше или ниже, на каждый градус добавляют (если она выше 15 °C) или убавляют (если она ниже 15 °C) к указанию ареометра 0,001. Молоко для исследования удельного веса лучше всего получать в течение второго часа после кормления ребенка.
Количественное определение жиров молока (метод Бабкова)
Принцип метода
Концентрированная серная кислота приводит к осаждению жира.
Необходимые реактивы
1. Серная кислота удельного веса 1,83–1,84.
2. Кислотно-алкогольная смесь (равные части амилового спирта и концентрированной соляной кислоты).
Оборудование: бутирометр.
Ход исследования
Исследуемое молоко узкой пипеткой вливают в бутирометр до метки «5». Прибавляют серную кислоту до горлышка бутирометра. Затем вращательными движениями содержимое бутирометра доводят до гомогенной смеси. После этого горлышко бутирометра наполняют кислотно-алкогольной смесью и центрифугируют в течение 1–2 мин. Отделившийся жир отсчитывают по шкале бутирометра (в процентах). Если уровень жира не доходит до метки «0», прибавляют к смеси горячую воду и вновь центрифугируют. Если процент жира выше 5, содержимое бутирометра разводят равным объемом воды и вновь центрифугируют, а полученный при этом процент жира умножают на 2.
Среднее содержание жира в женском молоке составляет 3,7 %.
Микроскопическое исследование молока
На очищенное и обезжиренное предметное стекло наносят пипеткой одну каплю исследуемого молока и покрывают покровным стеклом. Препарат рассматривают в микроскопе при опущенном конденсоре при среднем увеличении. Видны капельки жира, большее или меньшее число лейкоцитов, бактерии.
У здоровой женщины в молоке видны множество жировых капель, единичные лейкоциты, иногда бактерии. При воспалительных процессах (мастит) в препарате молока имеется большое число лейкоцитов (нейтрофилы) и микроорганизмов, главным образом стафилококков, в меньшей степени стрептококков; изредка встречаются и другие микробные ассоциации.
Выделения из соска могут быть при заболеваниях молочной железы различной этиологии (воспалительные процессы, туберкулез, актиномикоз, мастопатии, новообразования и др.). Из полученного материала готовят нативные препараты (каплю отделяемого помещают на предметное стекло и покрывают покровным) и тонкие мазки для цитологического, а при необходимости и бактериоскопического исследования.
Цитологическое исследование для решения вопроса о новообразовании требует большого опыта и навыка исследователя.
При бактериоскопическом исследовании мазков можно обнаружить кокковую и палочковую флору. При подозрении на туберкулез препараты красят по Цилю – Нильсену.
Глава 10Исследование мокроты
Сбор и обезвреживание материала
Мокротой называется патологический секрет, выделяемый с кашлем из легких и дыхательных путей. Больным при организации сбора мокроты необходимо разъяснять, что для исследования нужно собирать мокроту, выделенную при откашливании, а не слюну и слизь из носоглотки.
Для сбора мокроты используют чистую, сухую, широкогорлую склянку. Существуют индивидуальные плевательницы из темного стекла, с завинчивающимися крышками и градуировкой на боковой поверхности.
Сбор мокроты для общего клинического анализа осуществляется утром до приема пищи, примесь которой мешает исследованию. Собирают мокроту после тщательного полоскания рта и горла, чистки зубов.
Перед забором полость рта можно тщательно прополоскать раствором пищевой соды, фурацилина (1: 5000), 0,01 %-ным раствором калия перманганата. После этого больной, откашливаясь, собирает в посуду 3–5 мл мокроты. Анализ мокроты производят в день ее выделения.
Мокроту необходимо направить в лабораторию в течение 2 ч с момента забора, так как длительное стояние ведет к размножению флоры и аутолизу клеточных элементов. При необходимости мокроту сохраняют в холодильнике.
Сбор мокроты для выявления микобактерий туберкулеза осуществляется в течение суток, так как в лабораторию необходимо представить достаточное ее количество – не менее 12–15 мл.
Для сбора мокроты на чувствительность к антибиотикам используют стерильные чашки Петри.