шат препарат фильтровальной бумагой и микроскопируют. Метод применяется при срочном цитологическом исследовании.
Морфология клеточных элементов в спинномозговой жидкости
Лимфоциты по величине сходны с эритроцитами. При дифференцировании клеток в камере лимфоциты, окрашенные фуксином, имеют крупное ядро и узкий неокрашенный ободок цитоплазмы. В нормальной жидкости содержится 8–10 клеток. Количество их увеличивается при опухолях центральной нервной системы. Лимфоциты встречаются при хронических воспалительных процессах в оболочках (туберкулезном менингите, цистицеркозном арахноидите).
Плазматические клетки. Клетки крупнее лимфоцитов, ядро крупное, эксцентрично расположенное, большое количество цитоплазмы при сравнительно небольшом размере ядра (размер клеток – 6–12 мкм). Плазматические клетки обнаруживаются только в патологических случаях при длительно текущих воспалительных процессах в мозге и оболочках, при энцефалитах, туберкулезном менингите, цистицеркозном арахноидите и других заболеваниях, в послеоперационном периоде, при вялотекущем заживании раны.
Тканевые моноциты. Размер клеток – от 7 до 10 мкм. В нормальной жидкости иногда могут встречаться в виде единичных экземпляров. Обнаруживаются после оперативного вмешательства на центральной нервной системе, при длительно текущих воспалительных процессах в оболочках. Наличие тканевых моноцитов говорит об активной тканевой реакции и нормальном заживлении раны.
Макрофаги. Могут иметь ядра различной формы, чаще ядро расположено на периферии клетки, цитоплазма содержит включения и вакуоли.
Величина – от 7 до 17 мкм, иногда – 20–30 мкм. В нормальном ликворе макрофаги не встречаются. Наличие макрофагов при нормальном цитозе наблюдают после кровотечения или при воспалительном процессе. Как правило, они встречаются в послеоперационном периоде, что имеет прогностическое значение и говорит об активной санации ликвора.
Зернистые шары. Клетки с жировой инфильтрацией – макрофаги с наличием в цитоплазме капель жира. В счетной камере они имеют различную величину, форму, окрашены в темно-коричневый цвет, ядра клеток не видны.
В окрашенных препаратах клетки имеют небольшое периферически расположенное ядро и крупноячеистую цитоплазму. Величина ячеек различна и зависит от включенных капель жира. Зернистые шары обнаруживаются в патологической жидкости, полученной из мозговых кист в очагах распада мозговой ткани, при опухолях.
Нейтрофилы. В камере идентичны по виду нейтрофилам периферической крови. Наличие в ликворе нейтрофилов даже в минимальных количествах указывает или на бывшую, или на имеющуюся воспалительную реакцию.
Присутствие измененных нейтрофилов указывает на затухание воспалительного процесса.
Эозинофилы. Определяют по имеющейся равномерной, блестящей зернистости. Эозинофилы встречаются при субарахноидальных кровоизлияниях, менингитах, туберкулезных и сифилитических опухолях мозга.
Эпителиальные клетки. Эпителиальные клетки, ограничивающие подпаутинное пространство, встречаются редко. Это довольно крупные круглые клетки с небольшими круглыми или овальными ядрами. Обнаруживаются при новообразованиях, иногда при воспалительных процессах.
Опухолевидные клетки и комплексы. Их находят в камере и окрашенном препарате. Злокачественные клетки могут относиться к следующим видам опухолей:
1) медулобластома;
2) спонгиобластома;
3) астроцитома;
4) рак.
Кристаллы. Встречаются в спинномозговой жидкости редко, в случае распада опухоли. Элементы эхинококка – крючья, сколексы, обрывки хитиновой оболочки – находят редко.
Бактериоскопическое исследование на микобактерии туберкулеза
Для бактериоскопического исследования готовят тонкие мазки, высушивают их в термостате, обрабатывают смесью Никифорова (спирт и эфир поровну) в течение 10 мин, высушивают и окрашивают.
Если осадок незначительный, то из него сначала готовят препарат для исследования, а затем снимают покровное стекло и делают мазок для бактериоскопического исследования. Обнаруженные фибринозные свертки сначала исследуют микроскопически, а затем извлекают из-под покровного стекла на сухое предметное стекло, растягивают препаровальными иглами, высушивают, фиксируют на огне и смесью Никифорова и окрашивают по Цилю – Нильсену для исследования на наличие туберкулезных бацилл.
При окрашивании осторожно смывают водой краску и оставляют препарат для высыхания в вертикальном положении, но не высушивают фильтровальной бумагой. Туберкулезные бациллы обнаруживаются почти исключительно в фибринозных свертках.
Для бактериоскопического исследования, помимо окраски по Циль – Нильсену, мазок окрашивают по Граму и по Гале – Якобсону. Краску Гале – Якобсона готовят следующим образом: 1 часть карболового фуксина, 4 части насыщенного раствора метиленовой синьки и 35 частей дистиллированной воды. На фиксированные и обработанные смесью Никифорова мазки наливают краску, окрашивают в течение 10–15 с, смывают водой и высушивают. При этой окраске бактерии интенсивно окрашиваются и их нетрудно обнаружить.
Если материала мало, то следует приготовить для бактериоскопического исследования один мазок, сначала окрасить по Гале – Якобсону, а затем перекрасить его по Граму.
При окраске по Гале – Якобсону обнаруживаются менингококки, они находятся группами внутри нейтрофилов. При других формах гнойных менингитов микроорганизмы легко обнаружить при бактериоскопическом исследовании.
При туберкулезном менингите имеет место трудность обнаружения туберкулезных палочек, и нередко приходится потратить значительное время.
Химическое исследование
Осуществляется унифицированным методом с сульфациловой кислотой и на биохимическом анализаторе. Нормальное содержание белка в спинномозговой жидкости варьирует в пределах:
1) при поясничной пункции – 0,22–0,33 г/л;
2) при цистериальной пункции – 0,1–0,22 г/л;
3) при вентрикулярной пункции – 0,12–0,2 г/л.
Унифицированный метод определения белка с сульфациловой кислотой и сульфатом натрия
Интенсивность получения при коагуляции белка сульфациловой кислотой пропорциональна его концентрации.
Необходимые реактивы
1. 6 %-ный раствор сульфациловой кислоты.
2. 14 %-ный раствор безводного сульфата натрия.
3. Стандартный раствор альбумина – 1 %-ный раствор: 1,0 мл альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9 %-ного раствора хлорида натрия в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят объем раствором хлорида натрия до метки. Реактив нестойкий. Для стабилизации к стандартному раствору прибавляют 1 мл 5%-ного раствора азидида натрия. В этом случае при хранении в холодильнике реактив годен к употреблению в течение 2 месяцев.
4. 1 мл раствора альбумина.
5. 0,9 %-ный раствор хлорида натрия.
Специальное оборудование: фотоэлектроколориметр.
Ход исследования
Для анализа применяют свежеприготовленную смесь равных объемов 6 %-ного раствора сульфациловой кислоты и 14 %-ного раствора безводного сульфата натрия (рабочий раствор). В пробирку наливают 5 мл свежеприготовленного рабочего раствора и 0,5 мл ликвора. Тщательно перемешивают. Через 10 мин интенсивность помутнения измеряют на фотоэлектроколориметре в кювете с длиной оптического пути 1 см против контроля, длина волны 410–480 нм (сине-фиолетовый светофильтр). В контроль вместо реактива берут 0,9 %-ный раствор хлорида натрия. Расчет ведут по калибровочному графику.
Построение калибровочного графика: из стандартного раствора готовят разведения и обрабатывают их так, как опытные. В 5 пробирок наливают 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 и 1 мл стандартного раствора альбумина и в каждую из них доливают до объема 10 мл 0,9 %-ного раствора хлорида натрия. Концентрация белка в этих растворах соответственно 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 г/л.
Примечания
1. Если муть начинает оседать, перед измерением пробирку необходимо встряхнуть.
2. Перед определением целесообразно поставить реакцию Панди, и если результат реакции оценивают – 3+ или 4+, то перед началом количественного исследования ликвор надо развести изотоническим раствором хлорида натрия и при Расчете учесть степень разведения.
3. Прямолинейная зависимость при построении калибровочного графика сохраняется до 1 г/л, поэтому при более высоких концентрациях белка ликвор следует разводить.
Повышенное содержание белка отмечают при нарушении гемодинамики, воспалительных процессах, органических поражениях центральной нервной системы и оболочек мозга, при экстрамедуллярных опухолях спинного мозга. Пониженное содержание белка отмечается при гидроцефалии и повышенном образовании ликвора.
Большое практическое значение придается определению белкового индекса, отношению глобулинов к альбуминам. Белковые фракции определяются методом электрофореза.
Унифицированный метод определения глобулинов осаждением карболовой кислотой (реакция Панди)
Реакция основана на осаждении глобулинов насыщенным раствором карболовой кислоты.
Необходимый реактив
Насыщенный раствор карболовой кислоты – 100 г карболовой кислоты – растворяют в 1 л воды, встряхивают и оставляют в термостате при 37 °C на 6–8 ч. После пребывания при комнатной температуре в течение 7 дней надосадочную жидкость сливают и используют в качестве реактива.
Специальное оборудование: не требуется.
Ход исследования
На часовое стекло, положенное на черную бумагу, наливают 1 мл реактива и по краю наносят 1–2 капли ликвора.
Оценка результатов
В случае положительного результата в месте соприкосновения реактива с используемой спинномозговой жидкостью образуется молочно-белое облачко, переходящее в муть. Для обозначения результатов реакции Панди пользуются системой 4 плюсов: