Благодаря современным методам исследования появилась возможность выявить наличие даже небольшого количества гормонов, как полипептидных, так и стероидных. Широко применяются иммунологические методы, призваные выявить содержание гормонов гипоталамуса, гиповиза, яичников, надпочечников и прочих эндокринных желез и тканей в крови. Исследования на содержание гормонов в суточной моче применяются реже. В частности, таким образом можно выявить метаболиты андрогенов 17-КС (дегидроэпиандростерон, андростерон, андростендион), образующиеся в яичниках и надпочечниках организма женщин.
Гормональные функциональные пробы применяются при необходимости топической и дифференциальной диагностики эндокринных заболеваний. Также путем применения гормональных проб возможно уточнить функциональное состояние различных отделов гипоталамо-гипофизарно-яичниковой системы. Функциональные пробы подразделяются на стимуляционные и супрессивные. Стимуляционные пробы представляют собой введение в организм веществ, активирующих работу пораженных тканей, и назначаются при гипофункции желез. Если концентрация гормона растет в ответ на пробу, значит, причина патологии заключается в отсутствии рациональной центральной регуляции. При отсутствии изменений заболевание связано с поражением органа. Супрессивные пробы осуществляются при гиперфункции гормональных желез, в кровь пациента вводятся блокаторы деятельности желез. Если железа функционирует автономно, концентрация гормонов не изменится. Диагностические пары представляют собой анализ, назначаемый при подозрении на патологию эндокринных желез. Берутся анализы не только на гормоны, вырабатываемые эндокринной системой, но и на гормоны гипофиза. Показатель первичного поражения эндокринной железы – повышение уровня гормонов гипофиза и снижение уровня гормонов в периферических железах. Показатель гормоноактивного новообразования – снижение гормонов гипофиза и повышение гормонов периферических желез.
Методы определения содержания гормонов в крови
Иммунологические методы. Представляют собой определение содержания гормонов по их иммунологической активности. Путем применения данной группы методом измеряются антигенные детерминанты и характеризуется концентрация гормонов. Принцип действия иммунометодов – узнавание антигенов специфическими антителами, выработанными против гормона. Данная группа методов считается недостаточно точной, в ряде случаев клиническая картина заболевания отличается от предполагаемой согласно выявленному уровню гормона в крови. При этом задействуются более точные методы.
Биологические методы. Представляют собой методы определения уровня гормона по его биологической активности. Путем применения биометодов возможно измерение функционального влияния гормонов и получение характеристики гормональной активности. Биометоды дают представление о биологической мощности гормона. Биометоды должны соответствовать ряду важных требований. Прежде всего, они должны характеризоваться высокой чувствительностью для измерения более низкого уровня гормона в плазме по сравнению с нижним уровнем «нормы», обладать стабильной воспроизводимостью, отличаться технической простотой и специфичностью для определяемых молекул или их фракций.
Методы масс-спектрометрии. Основаны на применении технологии масс-спектрометрии и жидкостного хроматографа с высоким разрешением. Данная группа методов характеризуется высокой производимостью, специфичностью, требуемой чувствительностью и воспроизводимостью.
Виды иммунологических методов:
1. Радиоиммунологическое определение гормонов в различных средах и тканях организма. Данный метод позволяет адекватно оценить функциональное состояние как эндокринной, так и других физиологических систем организма.
2. Твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA). В качестве твердофазного носителя применяются полистироловые микропланшеты. При данном виде анализов используются конъюгаты антител с ферментом, при реакции с соответствующими составами образующие окрашенные соединения с определенными оптическими характеристиками. Применение специальных анализаторов позволяет достичь высокой точности измерений.
3. Флуоресцентный иммуноанализ. Принцип работы: применение в качестве метки редкоземельного элемента европия. Путем применения данного метода возможно определить пиктограммовые количества стероидных гормонов и концентрации 0,03–0,15 мЕд/л гиповизарных гормонов.
4. Метод усиленной люминесценции. Относится к методам люминесцентного иммуноанализа. Получил наиболее широкое применение. Принцип работы основан на усилении реакции люминесценции путем добавления люминогенного субстрата (люминол или изолюминол) и особого усилителя, увеличивающего интенсивность и продолжительность свечения. Метод характеризуется высокой чувствительностью и воспроизводимостью. Световой сигнал регистрируется люминометром, особым анализатором.
Глава 5Исследование желудочного содержимого
В состоянии покоя (натощак) из желудка здорового взрослого человека можно извлечь небольшое количество (в среднем 50 мл) желудочного содержимого обычно слабокислой или нейтральной реакции, состоящего из желудочного сока, поглощенной слюны, а также из заброшенного в желудок содержимого двенадцатиперстной кишки. Всего за сутки выделяется около 2 л желудочного сока. Объем сока в период желудочного пищеварения определяется уровнем плазмореи через слизистую оболочку желудка.
Желудочный сок – секрет желез его слизистой оболочки, образуется через 5–10 мин после приема пищи. Представляет собой бесцветную прозрачную жидкость кислой реакции, содержащую, помимо воды, в качестве основных составных частей соляную кислоту, протеазы, липазу, гастромукопротеин, белковые вещества, образующие слизь (мукопротеозы и мукопротеины). Кроме того, в желудочном соке обнаруживают хлориды калия, натрия, аммония, фосфаты, сульфаты и в небольшом количестве органические соединения (молочную кислоту, мочевину, креатин– и аденозинфосфатные кислоты, глюкозу).
Одним из основных компонентов желудочного сока является соляная кислота, выделяемая в полость желудка обкладочными клетками. Соляная кислота выполняет многообразные физиологические функции: создает оптимум pH для ферментов желудка, способствует набуханию белковых коллоидов пищи, подготавливая их к гидролитическому расщеплению, участвует в гормональном возбуждении деятельности главных желез желудка и экзокринной секреции панкреатической железы, является одним из регуляторов моторики желудка и тонкой кишки, оказывает бактерицидное действие и т. д.
Главными клетками желудка выделяются протеазы, которые осуществляют ферментативный гидролиз белковых субстратов пищи. Из них наибольшей протеолитической активностью обладает пепсин. Оптимум его действия при рН 1,5–2,0. Другие протеазы (гастриксин, катепсины, желатиназа, химозин) проявляют свою деятельность в более широких пределах рН.
Липаза желудочного сока – малоактивный фермент, который в зоне рН от 5,5 до 7,9 расщепляет жиры.
Слизь из желудочного сока является секретом клеток поверхностного эпителия, пилорических желез и добавочных клеток. Основу ее составляет комплекс мукопротеинов и мукопротеоз, осуществляющих защиту слизистой оболочки от протеолитического действия желудочного сока. Крупномолекулярные соединения придают ей буферные свойства (1 г муцина способен связать около 18 мл раствора соляной кислоты или 12 мл раствора щелочи).
Гастромукопротеин (внутренний фактор Кастла) необходим для всасывания в кишечнике витамина В12.
В желудочном соке, кроме того, присутствует ряд биологически активных крупномолекулярных соединений, обладающих противосвертывающим действием, липотропной активностью, способностью стимулировать эритропоэз.
Небольшое количество аммиака, мочевины и мочевой кислоты рассматривается как проявление экскреторной функции желудка.
Зондовые методы исследования
Исследование желудочного содержимого, полученного путем зондирования, служит одним из методов диагностики заболеваний желудка. Если зондирование проводят толстым зондом и получают одну порцию желудочного содержимого, то говорят об одномоментном зондировании. Если получают несколько порций желудочного содержимого, то говорят о фракционном зондировании. Фракционное зондирование проводят тонким зондом без оливы. Одномоментный метод не позволяет получить истинную картину желудочной секреции в динамике, а дает лишь ориентировочные сведения о секреторной и моторной функциях желудка.
Полное представление о секреторной функции желудка можно получить, сравнивая показатели работы желез желудка в покое и после их возбуждения каким-либо раздражителем. Базальной называют секрецию голодного желудка. В этом случае желудочный сок выделяется в ответ на раздражение слизистой оболочки желудка зондом. Исследование проводят в течение 1 ч, откачивая шприцем через каждые 15 мин все содержимое желудка. Получают 4 порции. Стимулируемой называют секрецию, возникающую в ответ на введение раздражителя. Ее также определяют в течение 1 ч через каждые 15 мин.
Применяют энтеральные и парентеральные раздражители секреции желудка. Из энтеральных унифицирован и широко применяется капустный «завтрак» – 7%-ный отвар сухой капусты (21 г сухой капусты заливают 500 мл воды, кипятят в течение 30–40 мин до объема отвара 300 мл, фильтруют через 2 слоя марли и хранят в холодильнике). Унифицированным парентеральным раздражителем признан гистамин. При субмаксимальной стимуляции фосфат гистамина вводят подкожно из Расчета 0,01 мг на 1 кг массы тела обследуемого, дигидрохлорид гистамина – 0,008 мг на 1 кг массы. При максимальной стимуляции по Кею доза фосфата гистамина определяется из Расчета 0,04 мг/кг, дигидрохлорида гистамина – 0,024 мг/кг.
После введения гистамина отмечаются сосудистые реакции, которые обычно непродолжительны. Однако применению увеличенной дозы должно предшествовать введение антигистаминных препаратов (2 мл 2%-ного раствора супрастина). Максимальная проба с гистамином позволяет судить о предельных возможностях желудка выделять кислоту и имеет преимущество для выявления истинной ахлоргидрии.