Микроскопия нативного препарата
Принцип метода
Микроскопическое исследование нативных препаратов мочевого осадка, полученного при центрифугировании мочи.
Необходимое оборудование
1. Центрифуга.
2. Микроскоп.
3. Центрифужные пробирки.
4. Предметные и покровные стекла.
Ход исследования
Приготовление препаратов: в центрифужную пробирку помещают 10 мл утренней мочи после тщательного ее перемешивания. Центрифугируют в течение 5 мин при скорости 2000 об./мин. Затем быстрым наклоном пробирки сливают прозрачный верхний слой, а оставшийся осадок переносят пипеткой с тонко оттянутым концом на середину предметного стекла и покрывают покровным. Надо стараться перенести осадок с минимальным количеством жидкости, чтобы покровное стекло покрывало его полностью. Большая капля расплывается, колеблется, препарат становится многослойным, и это затрудняет микроскопические исследования. Изучение препарата начинают с малого увеличения (8 × 10) для общего обзора, а более детальное изучение препарата с количественной оценкой структур производят при большом увеличении (10 × 40). Если структуры встречаются в каждом поле зрения, то количественную оценку выражают их числом в поле зрения, при небольшом количестве структур, когда их встречают далеко не в каждом поле зрения, – числом в препарате.
Различают организованный и неорганизованный осадок.
Эритроциты имеют дискообразную форму, окрашены в характерный желто-зеленый цвет. Включения в цитоплазме отсутствуют. В концентрированной моче кислой реакции эритроциты могут приобретать звездчатую форму. При длительном пребывании эритроцитов в моче низкой относительной плотности они теряют гемоглобин и имеют вид одноконтурных или двухконтурных колец. Деление эритроцитов на измененные и неизмененные не имеет первостепенного значения для решения вопроса об источнике гематурии.
Дифференцировать эритроциты надо с дрожжевыми грибами и кристаллами оксалатов округлой формы. Грибы в отличие от эритроцитов чаще овальной формы, более резко преломляют свет, имеют голубоватый оттенок и почкуются. Оксалаты обычно имеют различную величину и резко преломляют свет. Прибавление к препарату осадка капли 5%-ной уксусной кислоты приводит к гемолизу эритроцитов, оставляя грибы и оксалаты без изменения.
В норме эритроциты либо не встречаются, либо обнаруживаются единичные в препарате.
Гематурия может быть при поражении паренхимы почки (гломерулонефрите, пиелонефрите, опухолях и др.), при тяжелой физической нагрузке и при поражениях мочевыводящих путей (почечных лоханок, мочеточников, мочевого пузыря, уретры).
Лейкоциты в моче имеют вид небольших зернистых клеток округлой формы. При низкой относительной плотности мочи размер их увеличивается, и в некоторых из них («активных») можно наблюдать броуновское движение гранул. При бактериуриях в щелочной моче лейкоциты довольно быстро разрушаются.
Лейкоциты в моче представлены главным образом нейтрофилами, но иногда можно обнаружить лимфоциты и эозинофилы, которые отличаются обильной, равномерной, крупной, преломляющей свет зернистостью. Активные лейкоциты, так называемые клетки Штернгеймера—Мальбина, можно выявить следующими способами.
Реактив Штернгеймера—Мальбина.
Раствор I: 3 г генцианового фиолетового, 20 мл этилового спирта, 0,8 г оксалата аммония, 80 мл дистиллированной воды. Раствор II: 0,25 г сафранина, 10 мл этилового спирта, 100 мл дистиллированной воды. Рабочий раствор: 3 части раствора I + 97 частей раствора II. Сохраняется в течение 3 месяцев.
Ход исследования
Центрифугируют свежую утреннюю мочу. К осадку прибавляют 1–2 капли реактива, размешивают, каплю берут на стекло, покрывают покровным стеклом и микроскопируют. При этом различают 2 вида лейкоцитов: одни имеют ядра пурпурно-красного цвета и бесцветную или бледно-розовую цитоплазму, другие бледно-синее, иногда бледно-фиолетовое ядро и почти бесцветную цитоплазму. Бледно-синие клетки называются клетками Штернгеймера—Мальбина, в цитоплазме некоторых из них заметно активное движение гранул.
Реактив – 250 мг эозина, 10 мл глицерина, 2 мл 1%-ного фенола, 0,5 мл 40%-ного формалина, 87,5 мл дистиллированной воды.
Ход исследования
Такой же, как предыдущий. Клетки Штернгеймера—Мальбина не окрашиваются или имеют бледно-голубой цвет. Ядра всех остальных лейкоцитов окрашиваются в розовый цвет.
Реактив – 30 мл насыщенного раствора метиленового синего в абсолютном алкоголе, 1,6 мл 1%-ного раствора КОН, 110 мл бидистиллированной воды.
Ход исследования
Каплю реактива наносят на предметное стекло рядом с каплей мочевого осадка. Смешивают и микроскопируют в первые 5–10 мин.
Клетки Штернгеймера—Мальбина бесцветные, ядра остальных лейкоцитов – синего цвета.
В норме в мочевом осадке у мужчин от 0 до 3 лейкоцитов в поле зрения, у женщин – от 0 до 5 лейкоцитов в поле зрения.
Увеличение числа лейкоцитов в мочевом осадке свидетельствует о воспалительных процессах в почках или мочевыводящих путях.
Наличие в моче «активных» лейкоцитов свидетельствует об интенсивности воспалительного процесса независимо от его локализации.
Эпителиальные клетки
Эпителиальные клетки в мочевом осадке имеют различное происхождение, т. е. десквамация их происходит с органов, покрытых различными видами эпителия (многослойного плоского, переходного и кубического призматического).
Клетки плоского эпителия полигональной или округлой формы, больших размеров, бесцветные, с небольшим ядром, располагаются в виде отдельных экземпляров или пластами.
Клетки переходного эпителия различной формы (полигональные, «хвостатые», цилиндрические, округлые) и величины, имеют желтоватую окраску, интенсивность которой зависит от концентрации мочи и наличия пигментов, содержат довольно крупное ядро.
Среди клеток можно встретить двуядерные. Иногда в клетках наблюдают дегенеративные изменения в виде грубой зернистости и вакуолизации цитоплазмы.
Клетки почечного эпителия неправильной круглой формы, угловатые или четырехугольные, небольших размеров (в 1,5–2 раза больше лейкоцита), слегка желтоватого цвета. В цитоплазме клеток обычно выражены дегенеративные изменения: зернистость, вакуолизация, жировая инфильтрация.
В результате этих изменений ядра часто не выявляются. Клетки почечного эпителия относятся к кубическому и призматическому эпителию, выстилающему почечные канальцы. Чаще они располагаются в виде групп, цепочек. В некоторых случаях встречаются в виде комплексов округлой или фестончатой формы, состоящих из большого количества клеток разной величины с явлениями жирового перерождения.
В мочевом осадке практически всегда встречают клетки плоского и переходного эпителия от единичных в препарате до единичных в поле зрения.
Единичные в препарате клетки почечного эпителия на фоне нормальной микроскопической картины мочевого осадка не дают основания говорить о патологии.
Особого диагностического значения клетки плоского эпителия, попадающие в мочу из влагалища, наружных половых органов и мочеиспускательного канала, не имеют, но если их обнаруживают расположенными пластами в моче, взятой катетером, то это может указывать на метаплазию слизистой оболочки мочевого пузыря. Такую картину можно наблюдать при лейкоплакии мочевого пузыря и мочеточников, что является предопухолевым состоянием.
Переходный эпителий выстилает слизистую оболочку мочевого пузыря, мочеточников, почечных лоханок, крупных протоков предстательной железы и простатического отдела мочеиспускательного канала.
Усиленная эксфолиация клеток этого эпителия может быть при острых воспалительных процессах мочевого пузыря и лоханок, интоксикациях, а также при мочекаменной болезни и новообразованиях мочевыводящих путей.
Клетки почечного эпителия можно выявить в мочевом осадке при поражении паренхимы почек (нефритах), интоксикациях, расстройствах кровообращения. Обнаружение клеток почечного эпителия в тесной связи с цилиндрами говорит о тяжелом поражении почек.
Цилиндры – элементы осадка – представляют собой белковые или клеточные образования канальцевого происхождения, имеющие цилиндрическую форму и различную величину. В мочевом осадке различают следующие виды цилиндров: гиалиновые, зернистые, восковидные, эпителиальные, эритроцитарные, пигментные, лейкоцитарные.
Гиалиновые цилиндры имеют нежные контуры, прозрачны, при ярком освещении плохо заметны. На поверхности может быть легкая зернистость за счет аморфных солей или клеточного детрита. Образуются из свернувшегося белка.
Появление гиалиновых цилиндров свидетельствует о развитии протеинурии, что является следствием повышенной проницаемости клубочковых капилляров. Они представляют собой коллоидную форму белка, возникающую при изменении рН. Постоянно гиалиновые цилиндры присутствуют при органических поражениях почек, лихорадочных состояниях.
Зернистые цилиндры имеют более резкие контуры и состоят из плотной зернистой массы желтоватого цвета. Они образуются при наличии в эпителильных клетках выраженной дегенерации.
Восковидные цилиндры имеют резко очерченные контуры и гомогенную с блеском, слегка желтоватую структуру. Образуются из уплотненных гиалиновых и зернистых цилиндров при задержке их в канальцах. Они обнаруживаются при тяжелых поражениях паренхимы почек.
Эпителиальные цилиндры имеют четкие контуры и состоят из слущенных и склееннных друг с другом эпителиальных клеток канальцев. Они появляются при нефрозах, нефросклерозах и других патологических процессах в почках.
Эритроцитарные цилиндры желтоватого цвета, состоят из массы эритроцитов, образуются при почечной гематурии. Они обнаруживаются почти у половины больных с острым гломерулонефритом, а также при почечных паренхиматозных кровотечениях.
Пигментные цилиндры могут быть обнаружены при гемоглобинурии и миоглобинурии; они коричневого цвета, имеют сходство с зернистыми.
Лейкоцитарные цилиндры образуются из массы лейкоцитов, обнаруживаются при гнойных процессах в почках, пиелонефритах.
Кроме цилиндров, образованных из белка и клеток, в мочевом осадке иногда встречаются образования цилиндрической формы из аморфных солей, не имеющие практического значения. Эти образования растворяются при подогревании препарата или прибавлении к нему капли щелочи или кислоты.
В нормальной моче можно встретить единичные гиалиновые цилиндры (1–2 в препарате).
Цилиндрурия является симптомом поражения паренхимы почки; хотя и считается, что вид цилиндров особого диагностического значения не имеет, гиалиновые цилиндры подтверждают ренальную протеинурию, а лейкоцитарные и эритроцитарные дают возможность предположить источник лейкоцитурии и гематурии.
Унифицированное определение числа форменных элементов в суточном объеме мочи по методу Каковского—Аддиса
Принцип метода
Подсчет числа форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров) в суточном объеме мочи с помощью счетной камеры.
Специальное оборудование
Микроскоп, счетная камера.
Классический вариант исследования требует строгого соблюдения правил хранения мочи на протяжении длительного периода. Мочу собирают в течение суток: утром больной освобождает мочевой пузырь, а затем в течение 24 ч собирает мочу в сосуд с несколькими каплями (4–5) формалина или 2–3 кристаллами тимола; желательно хранить мочу в холодильнике.
Во избежание получения заниженных данных, обусловленных распадом форменных элементов в нейтральной (щелочной) моче или при низкой ее плотности, надо назначать больному в течение суток, предшествовавших исследованию, мясную пищу с ограничением жидкости, чтобы получить мочу кислой реакции и более высокой концентрации. Если нет возможности собрать мочу с учетом описанных условий, то можно собирать ее в течение 10–12 ч. В этом случае точность результата страдает, но собрать мочу легче. Собирают мочу за ночное время следующим образом: в 10 ч вечера больной освобождает мочевой пузырь, мочу выливают, и до 8 ч утра мочеиспускания не должно быть (интервал времени – 10 ч); всю мочу, полученную в 8 ч утра, посылают в лабораторию для исследования. При никтурии такой вариант сбора мочи не подходит.
Ход исследования
Собранную мочу тщательно перемешивают и измеряют ее объем. Для исследования получают осадок из количества мочи, выделенной за 12 мин (1/5 ч), которое рассчитывают по формуле:
Q = V / 5t,
где Q – объем мочи, выделенной за 12 мин, мл;
V – объем мочи, собранной за время исследования, мл;
t – время сбора мочи, ч;
5 – коэффициент пересчета за 1/5 ч.
Рассчитанное количество мочи центрифугируют в мерной центрифужной пробирке при скорости 3500 об./мин в течение 3 мин или при скорости 2000 об./мин в течение 5 мин, отделяют верхний слой, оставляя 0,5 мл мочи с осадком. Если осадок превышает 0,5 мл, то оставляют 1 мл мочи. Осадок тщательно перемешивают и заполняют счетную камеру. Подсчитывают раздельно количество лейкоцитов, эритроцитов, цилиндров (эпителиальные клетки не считают) и рассчитывают содержание форменных элементов в 1 мкл осадка мочи.
Расчет
Если подсчет проводят в камере Горяева, объем которой равен 0,9 мкл, то количество форменных элементов в 1 мкл определяют по формуле:
Х = А / 0,9,
где X – число форменных элементов в 1 мкл;
А – число форменных элементов, подсчитанных во всей камере;
0,9 – объем камеры (мкл).
Для камеры Фукса—Розенталя, объем которой 3,2 мкл, Расчет производят по формуле:
Х = А / 3,2.
Количество форменных элементов, выделенных с мочой за сутки, рассчитывают по формуле:
В = Х × 500 × 5 × 24 = Х × 60 000,
если для исследования взять 0,5 мл (500 мкл) из 12-минутной порции мочи, или:
В = Х × 1000 × 5 × 24 = Х × 120 000,
если осадок был обильным и был оставлен 1 мл (1000 мкл),
где X – число форменных элементов в 1 мкл мочи, оставленной для исследования с осадком;
В – число форменных элементов, выделенных за сутки;
500 (или 1000) – количество мочи, мкл, оставленной с осадком из 12-минутной порции мочи. Умножение на 5 и 24 дает Расчет количества клеток за 24 ч.
Нормальные величины суточной экскреции форменных элементов с мочой – до 2 × 106 лейкоцитов, до 1 × 106 эритроцитов и 2 × 104 цилиндров.
Для подсчета цилиндров необходимо просмотреть не менее 4 камер с сеткой Горяева или одну камеру Фукса—Розенталя.
Унифицированное определение количества форменных элементов в 1 мл мочи методом Нечипоренко
Принцип метода
Определение количества форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров) в 1 мл мочи с помощью счетной камеры.
Специальное оборудование
Микроскоп, счетная камера.
Ход исследования
Берут одноразовую порцию мочи (желательно утреннюю) в середине мочеиспускания, определяют рН (в моче со щелочной реакцией может быть частичный распад клеточных элементов); 5–10 мл мочи центрифугируют при скорости 3500 об./ мин в течение 3 мин, отделяют верхний слой, оставляя вместе с осадком 0,5 мл (500 мкл) мочи при небольшом осадке или 1 мл (1000 мкл) – при большом. Хорошо перемешивают осадок и заполняют счетную камеру. Подсчитывают отдельно лейкоциты, эритроциты и цилиндры во всей сетке камеры.
Расчет
Рассчитывают количество клеток в 1 мкл осадка мочи по формуле Х = А / 0,9 или Х = А / 3,2 (см. выше).
Установив эту величину, рассчитывают число форменных элементов в 1 мл мочи по формуле:
N = х × 500 / V,
если оставлено 0,5 мл (500 мкл) мочи с осадком.
Или же:
N = х × 1000 / V,
если оставлен 1 мл (1000 мкл) мочи с осадком,
где N – число форменных элементов в 1 мл мочи;
х – число форменных элементов в 1 мкл мочи, оставленной вместе с осадком;
500 (или 1000) – объем мочи, мкл, оставленной вместе с осадком;
V – количество мочи, взятой для центрифугирования.
В 1 мл мочи выделяется до 2000 лейкоцитов и до 1000 эритроцитов; цилиндры отсутствуют или обнаруживаются в количестве не более одного на камеру Фукса—Розенталя или на 4 камеры Горяева (до 20 в 1 мл).
Определение количества форменных элементов, экскретируемых с мочой за 1 мин, по методу Амбурже
Принцип метода
Определение количества форменных элементов, выделенных с мочой за 1 мин, с помощью счетной камеры.
Специальное оборудование
Микроскоп, счетная камера.
Ход исследования
Мочу собирают в течение 3 ч (180 мин). Перемешивают и 10 мл центрифугируют в течение 5 мин при скорости 2000 об./мин.
Надосадочную жидкость отсасывают, оставляя 1 мл, и после перемешивания заполняют камеру. Производят подсчет клеток в 1 мкл осадка мочи по формуле Х = А / 0,9 или Х = А / 3,2 (см. выше). Расчет числа форменных элементов, выделенных за 1 мин, проводят по формуле:
Н = х × 1000 / S × V / t,
где Н – число клеток в минутном объеме мочи;
х – число клеток в 1 мкл осадка;
V – объем мочи за 3 ч;
S – количество мочи, взятое для центрифугирования;
t – время, за которое собрали мочу, в минутах.
За 1 мин в норме с мочой выделяется до 2000 лейкоцитов и до 1000 эритроцитов.
Приведенные методы количественного исследования элементов мочевого осадка могут быть использованы для распознавания скрытой (не обнаруживаемой при ориентировочной микроскопии осадка) лейкоцитурии; для выяснения вопроса о преобладании лейкоцитурии или гематурии и оценки их степени, а также при динамическом наблюдении за этими симптомами для определения эффективности проводимой терапии.
При отрицательных результатах количественного исследования лейкоцитурии у пациентов с подозрением на латентно текущий хронический пиелонефрит повторный подсчет лейкоцитов следует проводить после провокационных проб (наиболее распространен преднизолоновый тест).
Принцип метода
Введение гормона активирует воспалительный процесс, и количество лейкоцитов в моче возрастает. Степень лейкоцитурии определяют по методу Нечипоренко до и после внутривенного введения преднизолона.
Специальное оборудование
Микроскоп, счетная камера.
Ход исследования
Утром больной опорожняет мочевой пузырь, и мочу выливают. Через час собирают мочу (контрольная порция), после чего внутривенно вводят 30 мг преднизолона в 10 мл изотонического раствора натрия хлорида.
После вливания с интервалами в 1 ч собирают 3 порции мочи, подлежащие, как контрольная порция, исследованию по Нечипоренко (собирая мочу, берут при мочеиспускании только среднюю порцию).
Еще раз исследуют мочу через 24 ч после вливания преднизолона.
Тест расценивают как положительный, если хоть в одной из порций мочи количество лейкоцитов увеличивается по сравнению с исходным в 2 раза и при этом выявляют активные лейкоциты.
Экспресс-метод определения скрытой лейкоцитурии (метод Gadeholt)
Принцип метода
При проведении пероксидазной реакции цитоплазма лейкоцита приобретает голубую или синюю окраску.
Необходимые реактивы
Краситель – 300 мг диаминофлуорена и 130 мг флюксина В растворяют в 70 мл 95%-ного этанола. К этой смеси добавляют 11 г ацетата натрия (CH3COONa × 3Н2О), растворенного в 20 мл 0,5%-ной уксусной кислоты, и 1 мл 3%-ной перекиси водорода. Через 48 ч реактив фильтруют, и он становится годным к употреблению. Хранить его необходимо в темной, химически чистой посуде и периодически фильтровать.
Ход исследования
10 мл свежевыделенной мочи фильтруют через фильтровальную бумагу, после чего на бумагу наносят 3 капли красителя. При содержании в 1 мкл мочи более 10 лейкоцитов на месте нанесения краски появляется темно-синее пятно. Проба считается отрицательной, если пятно красного цвета, и сомнительной, если пятно голубого цвета.
Проба проста и достаточно надежна, ответ можно получить через несколько минут. Экспресс-метод выявления скрытой лейкоцитурии имеет большое значение при профилактических осмотрах, особенно детей в яслях, детских садах и школах.
При положительном значении этой пробы лейкоцитурия выявляется и всеми другими методами, используемыми для ее количественного определения.
Неорганизованный осадок мочи состоит из солей, выпавших в осадок в виде кристаллов или аморфных масс. Характер солей зависит от коллоидного состояния мочи, рН и других свойств. При кислой реакции мочи обнаруживаются:
1) мочевая кислота – полиморфные кристаллы (ромбической, шестигранной формы, вид бочонков, брусков и др.), окрашенные в желтый цвет (иногда бесцветные). Кристаллы мочевой кислоты растворяются в щелочах, не растворяются в кислотах, макроскопически в осадке мочи имеют вид золотистого песка. Кристаллы мочевой кислоты обнаруживаются при лихорадочных заболеваниях, сопровождающихся повышенным распадом тканей, при тяжелой физической нагрузке, потреблении только мясной пищи, мочекислом диатезе;
2) ураты – аморфные мочекислые соли. Располагаются кучками желтовато-коричневатого цвета. Растворяются при нагревании и при добавлении щелочей. При действии кислот (уксусной или соляной) постепенно превращаются в бесцветные кристаллы мочевой кислоты ромбической формы. Макроскопически ураты после центрифугирования имеют вид плотного кирпично-розового осадка. В таких случаях необходимо освободиться от солей, так как они мешают микроскопическому исследованию. С этой целью используют реактив Селена (4 г буры и 4 г борной кислоты растворяют в 100 мл дистиллированной воды). В центрифужную пробирку после удаления надосадочной мочи наливают реактив Селена, смешивают, центрифугируют вновь и микроскопируют осадок. Ураты в моче появляются при употреблении в пищу продуктов, содержащих нуклеиновые кислоты, а также при повышенном распаде клеток при лейкозах, опухолях;
3) щавелевокислая известь (оксалаты) встречается в кислой моче, но может быть и в моче со щелочной реакцией. Кристаллы имеют форму октаэдров («почтовых конвертов»), а также круглую или овальную форму. Растворяются в соляной кислоте, не растворяются в щелочи и уксусной кислоте. Выпадение солей щавелевокислой извести происходит при употреблении с пищей некоторых фруктов и овощей;
4) углекислый кальций обнаруживается в форме мелких шариков. Растворяется в кислотах, выделяя углекислоту.
При щелочной реакции мочи обнаруживают:
1) кислый мочекислый аммоний (в моче детей может быть при кислой реакции). Имеет форму гирь и шаров, часто с отростками. Растворяется при нагревании и в щелочах. При добавлении кислот (соляной или уксусной) образуются бесцветные ромбические кристаллы мочевой кислоты;
2) трипельфосфаты – бесцветные кристаллы в форме «гробовых крышек». Растворяются в кислотах, не растворяются в щелочах;
3) фосфаты – аморфные массы солей сероватого цвета часто вместе с трипельфосфатами. Растворяются в кислотах, не растворяются в щелочах. Макроскопически осадок белого цвета;
4) нейтральная фосфорнокислая известь – кристаллы клиновидной формы, часто располагающиеся розетками, бесцветные (иногда могут быть в моче при слабокислой реакции). Растворяются в кислотах, не растворяются в щелочах.
Особого диагностического значения неорганизованный осадок не имеет. Большое количество кристаллов мочевой кислоты и уратов встречается при лихорадочных состояниях, процессах, связанных с массивным распадом клеток (лейкозах, опухолях), при почечнокаменной болезни и др.
В патологической моче встречаются:
1) цистин. Имеет вид шестигранных бесцветных прозрачных плиток, обнаруживается при кислой реакции мочи. Растворяется в щелочах, аммиаке, минеральных кислотах. Не растворяется в уксусной кислоте, спирте, ацетоне, эфире;
2) тирозин – кристаллы в виде тонких игл, собранных в пучки. Обнаруживается в моче с кислой реакцией. Растворяется в щелочи, минеральных кислотах. Нерастворим в спирте, ацетоне, эфире;
3) лейцин – блестящие мелкие шары с радиальной и концентрической исчерченностью. Встречаются в моче с кислой реакцией. Растворяются в минеральных кислотах и щелочах. Нерастворимы в спирте, ацетоне, эфире.
Нахождение этих кристаллов имеет диагностическое значение, поэтому для распознавания их недостаточно одних морфологических признаков. Необходимо использовать все микрохимические реакции, характерные для них, так как некоторые формы этих кристаллов имеют сходство с кристаллами мочевой кислоты, жиром, нейтральной фосфорнокислой известью. Кристаллы лейцина, тирозина и цистина обнаруживаются при подострой дистрофии печени, отравлениях фосфором;
4) жирные кислоты имеют вид тонких игл, иногда собранных в пучки. Встречаются редко, при патологических процессах, сопровождающихся жировой дистрофией и распадом клеток;
5) холестерин имеет вид тонких четырехугольных бесцветных пластинок с обломанным углом. Обнаруживается при патологических процессах, сопровождающихся распадом и жировой дистрофией клеток. В моче встречается редко;
6) билирубин – кристаллы в виде мелких желтовато-коричневых иголок, складывающихся в пучки или в виде зернышек. Обнаруживается в моче с желчными пигментами. Билирубин растворяется в щелочах и хлороформе. С азотной кислотой дает зеленое окрашивание;
7) гематоидин – кристаллы в форме ромбов или иголок, которые могут складываться в пучки и звезды. Цвет золотисто-желтый. Являются продуктом распада гемоглобина. В своей молекуле не содержат железа. Образуются в некротизированной ткани, в глубине гематом и в больших участках кровоизлияний;
8) гемосидерин – золотисто-желтые аморфные зернышки, находящиеся внутри клеток (в отличие от гематоидина). Представляет продукт распада гемоглобина и дает положительную реакцию на берлинскую лазурь, так как содержит железо. Обнаруживается при внутрисосудистом гемолизе (болезнь Маркиафава—Микели);
9) липоиды обнаруживаются в поляризационном микроскопе, где они дают двоякое преломление света. Двоякопреломляющие свет капли жира (внутри– и внеклеточные) имеют вид блестящего креста на темном фоне. Обнаруживаются при нефрозах (особенно амилоидно-липоидных);
10) лекарственные кристаллы встречаются при приеме некоторых медикаментов. Кристаллы пирамидона выпадают в виде коричневатых иголок, похожих на кристаллы билирубина, но длиннее, образующих пучки и звезды. Цвет мочи при этом розовато-красноватый. Кристаллы сульфаниламидных препаратов отличаются большим полиморфизмом. Почти всегда окрашены в желтоватый цвет, имеют вид снопов, шаров, брусков и т. д. Многие из них имеют сходство с кристаллами мочевой кислоты. Распознавание их производится при помощи индикаторной бумажки.
Фильтровальную бумагу пропитывают реактивом (см. ниже), высушивают, нарезают тонкими небольшими полосками, хранят в темном месте. Полоску бумаги опускают в осадок мочи. В присутствии кристаллов сульфаниламидных препаратов бумажка дает моментальное ярко-желтое окрашивание.
Необходимые реактивы
1 г парадиметиламидобензальдегида, 2 мл концентрированной НСl, 98 мл 2,24%-ного раствора химически чистой щавелевой кислоты.
Исследование мочи на опухолевые клетки
Опухолевые клетки могут быть обнаружены в моче, в отсосе и смыве из мочевого пузыря.
Свежевыделенную утреннюю мочу отстаивают в течение 1–2 ч. Пипеткой со дна собирают осадок и центрифугируют. Отстоявшуюся мочу разливают небольшими порциями в чашки Петри, просматривают на черном и светлом фоне и извлекают (если есть) плотноватые частицы сероватого и красноватого цвета, которые помещают на предметное стекло, растягивают и покрывают покровным. Другие препараты готовят из осадка после центрифугирования. Мочу для исследования на опухолевые клетки нельзя брать после урологического инструментального обследования, так как травмирование слизистой оболочки может привести к повышенной эксфолиации клеток и к их деформации, в результате чего может быть ошибочное толкование.
При подозрении на опухолевый процесс мочевого пузыря можно взять отсос из него. После опорожнения мочевого пузыря вводят катетер. На свободный конец катетера надевают шприц Жане и отсасывают содержимое пузыря. Из добытого материала готовят препараты.
Смыв производится следующим раствором: спирта 96%-ного (15 мл), 1%-ного раствора новокаина (81 мл). Раствор готовят стерильно. Для процедуры необходимо 50–100 мл раствора.
Мочевой пузырь освобождают, промывают и на 10 мин вводят указанный выше раствор (для усиления эксфолиации клеток). Затем пузырь опорожняют (у женщин с помощью катетера). Полученный материал центрифугируют. Из осадка готовят препараты, которые сначала просматривают в нативном виде. При наличии подозрительных клеток фиксируют и красят по Романовскому. В нативном препарате не всегда можно уловить все признаки злокачественного перерождения клеток. Поэтому требуется обязательное сочетание исследования нативного и окрашенного препарата.
Признаки злокачественного перерождения клеток:
1) полиморфизм величины, а часто и формы клеток; отдельные клетки могут быть гигантских размеров;
2) нарушения ядерно-протоплазменного соотношения в сторону увеличения ядра, иногда до гигантских размеров;
3) неправильная, часто уродливая, форма ядра;
4) наличие в ядрах нуклеол, часто больших, множественных, неправильной формы;
5) часто встречающиеся клеточные митозы;
6) способность клеток к фагоцитозу;
7) химическая анаплазия, гиперхромия ядра и резкая базофилия цитоплазмы отдельных клеток.
Небольшое количество одиночно расположенных клеток с перечисленными признаками не считается достоверным. Для подтверждения диагноза необходимо искать групповое их расположение и расположение в виде комплексов. Для распознавания клеток с признаками злокачественного перерождения требуются просмотр большого количества препаратов и опыт исследователя.
Злокачественные опухоли могут подвергаться распаду и некрозу. Присутствие в препаратах клеток с дегенеративными явлениями (резкой вакуолизацией, жировой дистрофией, детритом) и продуктов тканевого распада (гематоидина, холестерина, некротизированных тканевых фрагментов) является подозрительным на злокачественную опухоль. Такой материал требует особо тщательного исследования. Клетки злокачественных опухолей находят в моче при опухолях мочевого пузыря, предстательной железы и др. При опухолях половых органов и женской половой сферы опухолевые элементы также могут попадать в мочу. При опухолях почек злокачественные клетки в моче находят чрезвычайно редко. Подозрительным признаком на злокачественный процесс почки является наличие в мочевом осадке кристаллов гематоидина, жироперерожденных клеток, мелких некротизированных фрагментов и эритроцитов.
Определение диастазы мочи
В нормальной моче диастаза содержится в небольшом количестве – 16–64 единицы. Количество выше 128 единиц указывает на патологию (панкреатит, некроз поджелудочной железы, заболевание желчных путей). При продолжительной закупорке протока поджелудочной железы количество диастазы в моче может снизиться. При почечной недостаточности диастаза в моче отсутствует.
Метод определения диастазы мочи основан на переваривании крахмала диастазой.
Необходимые реактивы
1. Физиологический раствор (0,85%-ный раствор хлорида натрия).
2. Буферный раствор фосфата рН 7,2.
3. Толуол.
4. Раствор крахмала: 60–70 мл физиологического раствора нагревают до кипения. В отдельную пробирку наливают 2–3 мл физиологического раствора и всыпают туда 1 г растворимого крахмала, тщательно размешивают стеклянной палочкой, вливают его тонкой струей в кипящий физиологический раствор и смешивают. Пробирку несколько раз ополаскивают небольшими порциями физиологического раствора, выливая их в тот же стакан, дают вскипеть. После охлаждения переносят в мерную колбу на 100 мл и доливают физиологический раствор до метки. Этот 1%-ный раствор крахмала разводят в 10 раз физиологическим раствором. К 90 мл полученного 1%– ного раствора крахмала приливают 10 мл буферного раствора фосфатов с рН 7,2 и 10 мл толуола (при хранении в прохладном и темном месте раствор стоек в течение 3 месяцев). При отсутствии фосфатного буфера 1%-ный раствор крахмала годен в течение нескольких дней.
Для исследования необходим также приблизительно 0,02 н раствор йода: 20 мл 0,1 н раствора отмеривают в мерную колбу емкостью в 100 мл и доводят до метки водой. Можно пользоваться раствором Люголя.
Ход исследования
В штатив ставят 15 пробирок, разливают в каждую пробирку, кроме первой, по 1 мл физиологического раствора. В первую и вторую пробирку наливают по 1 мл испытуемой мочи, смешивают. Из второй пробирки переносят 1 мл смеси в третью, смешивают и 1 мл смеси переносят в четвертую и т. д. до пятнадцатой, из которой 1 мл смеси выливают. Объем жидкости в каждой пробирке 1 мл. Разведения смесей, начиная со второй пробирки: 2, 4, 8 и т. д.
В каждую пробирку наливают по 2 мл 1%-ного раствора крахмала и ставят весь штатив на 15 мин на водяную баню при 45 °C, после чего штатив переносят в холодную воду (для прекращения действия фермента).
После этого в каждую пробирку вносят по одной капле 0,02 н раствора йода и наблюдают за стойкостью окрашивания в пробирках (синего, красно-синего, красного или желтого). Если окраска исчезает быстро, то прибавляют по каплям йод, пока она не будет исчезать в течение нескольких минут.
Расчет
В той пробирке, где жидкость окрашена в синий цвет, диастатического действия нет. Оно закончилось в предыдущей пробирке, которую и берут для Расчета. Например: в шестой пробирке имеется непереваренный крахмал. Вычисляют, какое количество мочи содержится в пятой пробирке (разведение 1 : 16), где нет синего оттенка. 1/16 мл мочи переваривает 2 мл крахмала, 1 мл мочи – 32 мл крахмала.
Результат
d (диастаза) 45° / 15 ‘ = 32 единицы.
Исследование мочевых камней
Мочевые камни могут быть мочекислыми, оксалатовыми, фосфатовыми, цистиновыми.
Необходимые реактивы
1. Соляная кислота.
2. Азотная кислота.
3. Аммиак.
4. Ледяная уксусная кислота.
5. Молибденовокислый аммоний.
6. 30%-ный раствор едкого натра.
Ход исследования
Камень измельчают в ступке. Частицы камня сжигают на листочке платины. Если остаются преимущественно несгорающие частицы – это фосфаты, карбонаты, щавелевокислая известь.
Если частицы сгорают – это мочевая кислота, цистин, ксантин, фибрин. Присутствие оксалатов дает своеобразное красное тление, при этом образуется окись кальция, которая изменяет цвет фенолфталеиновой бумаги, смоченной в воде, на красный. Цистин горит синеватым пламенем и дает запах серной кислоты. Другую часть порошка растворяют в крепкой соляной кислоте. Та часть, которая растворяется, – раствор, нерастворенная часть – осадок.
Нерастворенными остаются органические субстанции и мочевая кислота. Осадок отделяют центрифугированием. Часть его осторожно выпаривают в фарфоровом тигле с каплей азотной кислоты до высыхания: мочевая кислота дает покраснение, добавление аммиака – пурпурно-красное окрашивание, а добавление едкого натра – сине-фиолетовое (мурексидная проба).
Другую частицу сжигают на листочке платины. При сгорании мочекислых соединений появляется запах синильной кислоты.
Раствор (солянокислый) может содержать щавелевокислую и сернокислую известь, фосфаты, цистин, ксантин.
Прибавляют немного аммиака, выпадает осадок (II) из фосфатов и оксалатов.
Осадок II отделяют центрифугированием и прибавляют к нему ледяную уксусную кислоту и воду. Растворяются фосфаты (раствор II), нерастворимыми остаются оксалаты, а также цистин. Центрифугируют, получают осадок III.
Осадок III: оксалаты растворяют в соляной кислоте. При нейтрализации аммиаком они вновь выпадают. При сжигании частицы осадка происходит тление и образуется щелочно реагирующий порошок.
Раствор II. Уксуснокислый раствор делят на 2 пробирки. В одну прибавляют немного оксалата аммония. Если в растворе находилась фосфорнокислая известь, то она выпадает в виде кристаллов щавелевокислого кальция. Их отфильтровывают и к фильтрату (раствор II) прибавляют 1/3 объема аммиака. Появление кристаллического осадка указывает на присутствие магнезии и фосфорнокислых солей.
Во вторую пробирку прибавляют несколько капель азотной кислоты и молибденовокислого аммония, слегка подогревают. Пожелтение и выпадение небольшого осадка доказывает присутствие фосфорной кислоты. Это говорит о наличии фосфата кальция.
На предметное стекло помещают каплю соляной кислоты и немного измельченного камня. Под микроскопом наблюдают за выделением пузырьков углекислоты.
Часть измельченного камня переносят в пробирку и взвешивают в воде, прибавляют немного 30%-ного раствора едкого натра, слегка подогревают, держа над пробиркой красную лакмусовую бумажку. Пары аммиака вызывают посинение бумаги. Если обе последние пробы дают отрицательный результат, то камень не содержит магнезиальных соединений.
Исследуют утреннюю порцию мочи.
Обнаружение белка
В норме белок в моче не обнаруживают.
Принцип метода
Изменение окраски индикатора в присутствии белка.
Необходимые реактивы
1. 5,5-диэтилбарбитуровой кислоты натриевая соль (мединал).
2. Натрия ацетат (NaOOCCH3 × 3Н2О).
3. НСl 0,1 моль/л.
4. Барбитал-ацетатный буфер рН 8,6: 8,6 г мединала и 6,48 г ацетата натрия растворяют в 100 мл воды, добавляют 60 мл НСl и доводят до 1 л водой.
5. Бромфеноловый синий водорастворимый.
6. Цинка сульфат (ZnSO4 × 7Н2О).
7. Раствор индикатора: 0,5 г бромфенолового синего и 50 г сульфата цинка растворяют в 1 л воды.
8. Уксусная кислота: к 1 мл концентрированной уксусной кислоты добавляют 99 мл воды.
9. Раствор альбумина: 10 г альбумина растворяют в 1 л изотонического раствора хлорида натрия (9 г/л), рабочие растворы альбумина готовят путем разведения основного раствора в 2; 4; 8 и 16 раз водой.
10. Натр едкий 0,02 моль/л.
Ход исследования
На фильтровальную бумагу, предварительно пропитанную барбитал-ацетатным буфером и высушенную, наносят 0,02 мл исследуемой мочи.
После высыхания бумагу с нанесенной пробой окрашивают индикатором, а избыток краски отмывают раствором уксусной кислоты в течение 5–7 мин.
Результат оценивают визуально, сравнивая окраску в опыте с окраской, которую дают стандартные растворы альбумина, обработанные так же, как и опытная проба. Метод позволяет обнаружить в моче белок, содержание которого составляет 2 мкг в пробе.
Выделение аминоазота за сутки не превышает 1–2 мг/кг. В ночное время выделяется 2/3–3/4 суточного количества аминоазота.
Гипераминоацидурия возникает при наследственной (синдром Дебре – де Тони – Фанкони) и приобретенной (гломерулонефрит) патологии в почках, а также при некоторых заболеваниях печени. Для выяснения причины гипераминоацидурии необходимы определение концентрации аминокислот в крови и моче и вычисление их клиренса.
Принцип метода
Аминокислоты при нагревании с нингидрином образуют соединения, окрашенные в сине-фиолетовый цвет.
Необходимые реактивы
1. Нингидрин.
2. Ацетон.
3. Уксусная кислота (ледяная).
4. Раствор нингидрина: 5 г нингидрина на 1 л смеси (к 0,5 г нингидрина прибавляют 95 мл ацетона, 1 мл ледяной уксусной кислоты и 4 мл дистиллированной воды).
5. Гликолол (глицин).
6. Раствор глицина: 150 мг глицина растворяют в 100 мл дистиллированной воды (1 мл раствора содержит 1,5 мг глицина, что соответствует 0,28 мг аминоазота). Из данного раствора глицина готовят серию разведений: 1; 3, 6; 9; 18; 24; 36; 54 мл раствора глицина доводят до 100 мл водой. Приготовленные растворы соответствуют 0,28; 0,84; 1,68; 2,52; 5,04; 6,72; 10,08; 16,12 мг аминоазота в 100 мл.
Растворы стабильны при хранении в холодильнике в течение 1 месяца.
Ход исследования
На фильтровальную бумагу наносят 0,02 мл мочи и после подсушивания окрашивают раствором нингидрина, затем высушивают на воздухе до полного исчезновения запаха уксусной кислоты и помещают в сушильный шкаф при температуре 60 °С на 15 мин.
Окраску опыта сравнивают с окраской стандартных растворов глицина, обработанных так же, как образец мочи, для чего берут по 0,02 мл каждого раствора. Результаты выражают в миллиграммах аминоазота, выделенного с мочой за сутки.
Принцип метода
Азид натрия и йод образуют комплекс бурого цвета, который обесцвечивается в присутствии цистина и гомоцистина.
Необходимые реактивы
1. Натрия азид.
2. Йод кристаллический.
3. Раствор йода: 12,69 г кристаллического йода отвешивают в бюксе, растворяют в насыщенном растворе йодида калия (37 г KI в 26 мл дистиллированной воды), переносят в колбу и доливают дистиллированной водой до 1 л. Можно использовать фиксанал йода 0,1 н.
4. Этиловый спирт 96%-ный.
5. Раствор азида натрия: 1,5 г азида натрия растворяют в 50 мл раствора йода и доводят объем этиловым спиртом до 100 мл. Раствор хранят в посуде темного стекла в холодильнике.
Ход исследования
Каплю мочи наносят на фильтровальную бумагу и после высушивания добавляют 1 каплю раствора азида натрия. В течение 5 мин наблюдают за исчезновением бурой окраски.
По времени исчезновения окраски судят о наличии аминокислот в исследуемой моче. Для полуколичественной оценки результатов окраску пробы можно сравнивать с цветной шкалой, для получения которой готовят раствор цистина и гомоцистина, содержащий 0,6 мг каждой аминокислоты в 1 мл.
Из этого раствора готовят растворы с содержанием аминокислот от 0,6 до 0,3 мг/мл. Нижняя граница чувствительности пробы – 0,3 мг/мл.
Бурая окраска в норме исчезает через 2–3 мин после добавления азида натрия.
Ложноположительную реакцию дают ангидрид аргинин-янтарной кислоты, ацетон, некоторые лекарственные препараты.
Тест положительный при наследственной или приобретенной цистинурии или гомоцистинурии, в этом случае окраска остается более 5 мин.
Пролинурия возможна при патологии почек и как симптом наследственного нарушения обмена.
Принцип метода
Изатин образует с некоторыми аминокислотами специфически окрашенные соединения.
Необходимые реактивы
1. Изатин.
2. Ацетон.
3. Раствор изатина в ацетоне 0,2 г/л (раствор хранят в холодильнике при температуре 4 °С.
4. Соляная кислота 1 моль/л.
Ход исследования
Фильтровальную бумагу пропитывают раствором изатина в ацетоне и высушивают. Затем наносят на нее одну каплю мочи и высушивают при 100 °С в течение 10 мин, смачивают раствором соляной кислоты и промывают водой.
Сине-серую окраску дает повышенное содержание фенилаланина, коричневую – триптофан, пурпурную – смесь различных аминокислот, а появление синей окраски в виде ободка свидетельствует о присутствии в моче свободного пролина (не менее 0,1 мг/мл). Можно сравнивать интенсивность окраски с цветной шкалой. Для приготовления стандартных растворов, содержащих от 0,1 до 0,5 мг/мл соответствующих аминокислот, используют растворы аминокислот с исходной концентрацией 0,5 мг соответствующей аминокислоты в 1 мл раствора.
Кетокислоты в большом количестве выделяются с мочой при нарушении различных обменных процессов, в частности цикла Кребса; производные фенотиазида или салицилата – при отравлениях ими; 3-оксиантраниловая кислота – при нарушениях обмена триптофана.
Принцип метода
Треххлористое железо в присутствии НСl дает с кетокислотами специфически окрашенные соединения.
Необходимые реактивы
1. Железо треххлористое (FeCl3 × 6Н2О), 10%-ный раствор.
2. НСl, 10%-ный раствор.
3. Аммиак водный концентрированный.
4. Магния хлорид (MgCl2 × 6Н2О): к 11 г хлорида магния прибавляют 20 мл концентрированного водного аммиака и объем доводят водой до 1 л.
Ход исследования
Вариант I – к 0,5 мл мочи добавляют 0,25 мл раствора треххлористого железа, при положительной реакции появляется темно-зеленый осадок.
Вариант II – для связывания фосфатов, мешающих реакции, к 4 мл мочи прибавляют 1 мл раствора хлорида магния, перемешивают и через 5 мин фильтруют. К фильтрату добавляют по 2 капли раствора соляной кислоты и раствора треххлористого железа; в течение 5 мин наблюдают развитие окраски.
О наличии кетокислот судят по характеру окраски, однако следует иметь в виду, что окраска может развиваться и за счет других соединений (табл. 37).
Таблица 37
Цветная реакция различных соединений с треххлористым железом
Принцип метода
Кетокислоты образуют с 2,4-динитрофенилгидразином окрашенные гидразоны.
Необходимые реактивы
1. НСl, 2 моль/л.
2. 2,4-динитрофенилгидразин (2,4-ДНФГ): 2 г 2,4-ДНФГ растворяют в 1 л 2 моль/л НСl.
3. Диэтиловый эфир.
4. Натрия карбонат (NaО2СО3), 100 г/л.
Ход исследования
Смешивают 1 мл раствора 2,4-ДНФГ и 0,25 мл мочи. Через 10 мин прибавляют 1,25 мл диэтилового эфира и перемешивают, эфирный слой отсасывают и переносят в пробирку, куда добавляют равный объем раствора натрия карбоната. Содержимое пробирки перемешивают.
При положительной пробе развивается окраска от желтой до оранжево-коричневой. В норме проба отрицательная, окраска не развивается.
Принцип метода
В щелочной среде гомогентизиновая кислота окисляется с образованием соединений сине-фиолетового цвета.
Необходимый реактив
Едкий натр, 100 г/л.
Ход исследования
К 0,5 мл мочи прибавляют 3–4 капли раствора едкого натра, результат оценивают через 1–2 мин.
При положительной реакции развивается сине-фиолетовое окрашивание, при отрицательной окраска не возникает.
Принцип метода
Превращение индикана в индоксил после гидролиза эфирной связи сильной минеральной кислотой и последующее окисление индоксила треххлористым железом с образованием окрашенного соединения.
Необходимые реактивы
1. Свинца ацетат (СН3СОО)Рb × 3Н2О), 100 г/л раствора.
2. НСl концентрированная.
3. Железо треххлористое (FeCl3 × 6Н2О).
4. Реактив Обермейра: 0,4 г треххлористого железа растворяют в 100 мл концентрированной НСl.
5. Хлороформ.
6. Натрия тиосульфат (Na2S2O3 × 5H2O), 200 г/л раствора.
Ход исследования
К 4 мл мочи прибавляют 0,4 мл раствора ацетата свинца для осаждения желчных пигментов, солей и других веществ, мешающих реакции.
Фильтруют, 1–2 мл фильтрата смешивают с равным объемом реактива Обермейра, прибавляют 0,5–1 мл хлороформа и осторожно перемешивают.
Если слой хлороформа окрашивается в синий или красный цвет, его отсасывают и добавляют к нему 2–3 капли тиосульфата натрия.
При положительной реакции окраска хлороформа не исчезает после добавления тиосульфата натрия. В норме реакция отрицательная.
Принцип метода
При нагревании фруктозы с резорцином в кислой среде образуются соединения, окрашенные в красный цвет.
Необходимые реактивы
1. НСl, 1 моль/л.
2. Резорцин: 5 г в 1 л, 1 моль/л раствора НСl.
Ход исследования
К 2 мл мочи приливают 1 мл раствора резорцина и нагревают до закипания.
При положительной пробе развивается интенсивное красное окрашивание. В норме окраска не появляется.
Оценку пробы проводят в момент закипания, так как при длительном кипении окраска может развиться при наличии глюкозы. Пищевая нагрузка медом и фруктами может дать положительную пробу.
Принцип метода
Лактоза и мальтоза в щелочной среде при нагревании с аммиаком образуют окрашенные соединения.
Необходимые реактивы
1. Аммиак водный концентрированный.
2. Калий едкий, 200 г/л раствора.
Ход исследования
К 5 мл мочи приливают 2,5 мл аммиака и 0,2 мл раствора едкого калия. Нагревают на водяной бане в течение 30 мин при температуре 60 °С.
При положительной реакции на лактозу появляется коричневая окраска, а при наличии мальтозы – красная окраска. В норме окраска не развивается.
Принцип метода
Пентозы с орцином и треххлористым железом при нагревании в кислой среде образуют окрашенные соединения.
Необходимые реактивы
1. 5-метилрезорцин (орцин).
2. НСl концентрированная.
3. Железо треххлористое (FeCl3 × 6Н2О), 100 г/л раствора.
4. Реактив Биаля: 1 г орцина растворяют в 500 мл соляной кислоты и добавляют 1 мл раствора треххлористого железа.
Ход исследования
Нагревают 1 мл мочи до кипения с 5 мл реактива Биаля.
При положительной пробе появляется яркая желто-зеленая окраска. В норме проба отрицательная.
Обнаружение глюкозы, фруктозы, пентозы, лактозы и мальтозы в моче может быть результатом врожденных ферментопатий, а лактоза и мальтоза могут быть обнаружены при нарушении их гидролиза в тонкой кишке.
Принцип метода
Метилтриметиламмония бромид (ЦТАБ) с гликозамино-гликанами образует в кислой среде белый осадок.
Необходимые реактивы
1. Лимонная кислота.
2. Едкий натр.
3. Цитратный буфер, 1 ммоль/л, рН 5,7: в небольшом количестве воды растворяют 210 г лимонной кислоты, добавляют 120 г едкого натра, растворяют, охлаждают и доливают водой до 1 л.
4. Раствор ЦТАБ, 25 г в 1 л цитратного буфера.
Ход исследования
К 5 мл мочи приливают 1 мл раствора ЦТАБ и в течение 30 мин наблюдают образование осадка. Пробу проводят при комнатной температуре, для исследования берут свежевыделенную мочу.
Проба считается положительной при образовании осадка. В норме проба отрицательная. Следует учитывать, что проба дает 40% ложноположительных результатов.
Высокое содержание кальция в моче может быть при гипервитаминозе D и гиперпаратиреозе.
Принцип метода
Ионы кальция со щавелевой кислотой образуют нерастворимую щавелевокислую соль.
Необходимые реактивы
1. Щавелевая кислота.
2. Аммония оксалат.
3. Уксусная кислота ледяная.
4. Реактив Сулковича: в 50 мл дистиллированной воды растворяют по 2,5 г щавелевой кислоты и оксалата аммония, добавляют 5 мл ледяной уксусной кислоты и доводят объем раствора до 150 мл.
Ход исследования
Смешивают по 0,5 мл мочи и реактива Сулковича. Через 1–2 мин оценивают степень помутнения.
Степень помутнения оценивают визуально:
– 0 – отсутствие помутнения;
– 1 – слабое помутнение;
– 2 – умеренное помутнение;
– 3 – значительное помутнение;
– 4 – резко выраженное помутнение.
О повышенном содержании кальция в моче свидетельствуют 3 и 4-я степени помутнения.
После выявления положительных результатов описанных тестов больной нуждается в тщательном обследовании с помощью точных количественных методов в специализированных учреждениях.