Микробиологическое исследование мочи производят при воспалительных заболеваниях мочеиспускательных путей.
Наиболее частыми возбудителями воспалительных процессов мочевого тракта являются грамотрицательные бактерии: Е. coli, Proteus, Providencia, Enterobacter, Klebsiella, Psaeruginosa, Serratia, Streptococcus группы Д. Возбудителями могут быть также Staph. aureus, Staph. epidermidis, Candida albicans, Mycoplasma и другие микроорганизмы.
Взятие мочи для исследования
Микробиологическое исследование мочи нужно проводить до начала антибактериальной терапии.
После тщательного туалета наружных половых органов в стерильную посуду собирают среднюю порцию свободно выпущенной мочи в количестве 3–5 мл. Взятие мочи с помощью катетера связано с риском инфицирования мочевых путей, поэтому его желательно избегать. Катетеризацию производят только в случаях необходимости – если больной неспособен мочиться или для разграничения воспалительного процесса в почках и мочевом пузыре. С этой целью мочевой пузырь опорожняют и вводят в него 50 мл раствора, содержащего 40 мг неомицина и 20 мг полимиксина. Через 10 мин берут пробы мочи для исследования. При локализации процесса в мочевом пузыре моча остается стерильной, при инфекции в почках отмечается бактериурия.
Мочу можно получить от больного путем надлобковой пункции мочевого пузыря. Этот метод взятия мочи дает наиболее достоверные результаты исследования, однако имеется опасность инфицирования больного.
Микробиологическое исследование мочи надо проводить как можно быстрее после ее получения от больного, с тем чтобы избежать размножения находящихся в ней микроорганизмов. Размножение микробов в моче до начала анализа приводит к ложным результатам при количественном определении бактериурии и может дезориентировать в отношении возбудителя заболевания. Если немедленное исследование мочи невозможно, то ее следует хранить в холодильнике при температуре 4 °С не более суток.
Проведение исследования
Определяют степень бактериурии – количество колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл мочи методом секторных посевов мочи. Платиновой петлей диаметром 2 мм (вместимостью 0,005 мл) производят посев мочи – 3–4 штриха на сектор чашки Петри с простым агаром. Чашку инкубируют при температуре 37 °С в течение 18–24 ч, после чего подсчитывают число колоний, выросших в разных секторах.
Колонии, выросшие на плотной питательной среде, отсевают в пробирки со скошенным агаром, выделенную чистую культуру идентифицируют и определяют ее чувствительность к антибактериальным препаратам.
Ускоренные методы определения степени бактериурии основаны на определении продуктов метаболизма, образующихся при размножении микроорганизмов в моче. Они дают менее точные результаты, чем метод секторных посевов, и используются преимущественно при массовых профилактических обследованиях больших контингентов людей или для экспресс-диагностики. При положительном результате, полученном ускоренными методами, необходимо дальнейшее исследование с помощью более точного бактериологического метода.
Нитритный тест
Нитриты, являющиеся продуктами метаболизма представителей семейства энтеробактерий, могут быть обнаружены в моче с помощью реактива Грисса. Готовят два раствора: I – 1,25 г сульфаниловой кислоты растворяют в 500 мл 30%– ной уксусной кислоты; II – 2,5 г α-нафтиламина растворяют в 500 мл 30%-ной уксусной кислоты. Оба раствора хранят в защищенном от света месте.
Непосредственно перед исследованием оба раствора смешивают в равных количествах, 1 мл смеси добавляют к 1 мл мочи. Появление красного окрашивания свидетельствует о присутствии в 1 мл мочи не менее 105 микробных клеток.
ТТХ-тест
Трифенилтетразолия хлорид (ТТХ) под действием продуктов жизнедеятельности микроорганизмов переходит из бесцветного в красный не растворяющийся в воде трифенилформазан. Интенсивность окраски находится в прямой зависимости от степени бактериурии.
Готовят три раствора: I – насыщенный раствор двузамещенного фосфата натрия; II – 750 мл ТТХ растворяют в 100 мл раствора I; III – рабочий раствор: 4 мл раствора I смешивают со 100 мл раствора II. Хранят растворы в прохладном, защищенном от света месте. Срок хранения растворов I и II – до 2 месяцев, рабочего раствора – не более 2 недель.
При постановке реакции пользуются стерильной посудой.
К 2 мл мочи прибавляют 0,5 мл рабочего раствора и помещают после перемешивания в термостат при температуре 37 °С. После 4-часовой инкубации учитывают результаты. Появление на дне пробирки красного осадка свидетельствует о наличии в 1 мл мочи не менее 105 микробных клеток.
Ускоренные методы позволяют дать немедленный ответ. При использовании бактериологических методов лаборатория дает предварительный ответ через день после получения результатов определения степени бактериурии и окончательный – через 3–4 дня после выделения микроорганизмов, их идентификации и определения чувствительности к антибактериальным препаратам. В окончательном ответе указывают степень бактериурии, вид выделенных культур, их чувствительность к лекарственным веществам.
Оценка результатов
Основная задача при интерпретации полученных данных заключается в доказательстве этиологической роли микроорганизмов, выделенных из мочи. Учитывают комплекс тестов: степень бактериурии, вид выделенных культур, повторность их выделения в процессе заболевания, присутствие в моче монокультуры или ассоциации микроорганизмов.
Степень бактериурии позволяет дифференцировать инфекционный процесс в мочевых путях с контаминацией мочи с нормальной микрофлорой.
Оценку производят на основании следующих критериев:
1) степень бактериурии, не превышающая 103 КОЕ/мл мочи, свидетельствует об отсутствии воспалительного процесса и обычно является результатом контаминации мочи;
2) степень бактериурии, равная 104 КОЕ/мл, расценивается как сомнительный результат. Исследование следует повторить;
3) степень бактериурии, равная и выше 105 КОЕ/мл мочи, указывает на наличие воспалительного процесса.
Изменение степени бактериурии в процессе заболевания может быть использовано для контроля над течением процесса и эффективностью терапии: уменьшение степени бактериурии свидетельствует о благоприятном течении заболевания и эффективности использованных лекарственных препаратов.
В некоторых случаях у больных, получающих антибактериальную терапию, при плохом оттоке мочи, при ее низкой относительной плотности и рН ниже 5,0 может наблюдаться низкая степень бактериурии при имеющемся заболевании. Поэтому, помимо степени бактериурии, следует учитывать вид выделенных из мочи микроорганизмов.
Эшерихии, протей, синегнойная палочка, клебсиеллы чаще выделяются из мочи больных уроинфекцией. Дифтероиды, лактобациллы и другие грамположительные палочки обычно выделяются из мочи здоровых людей. Повторное выделение из мочи культуры одного вида, типа, варианта свидетельствует об инфекционном процессе.
Монокультура чаще выделяется при острых воспалительных процессах и коррелирует с высокой степенью бактериурии. Ассоциации микроорганизмов чаще встречаются при хронических процессах.
При окончательной оценке результатов микробиологического исследования мочи необходимо учитывать данные клиники и другие лабораторные анализы.
Бактериоскопическое исследование мочи с целью обнаружения туберкулезных микобактерий
Утреннюю порцию мочи собирают в стерильную посуду, отстаивают в течение 1–2 ч. Образовавшийся осадок собирают пипеткой в центрифужную пробирку, центрифугируют. Из осадка приготовляют препараты, хорошо высушивают (плохо высушенные препараты сползают при окраске), фиксируют и красят по Цилю—Нильсену.
Необходимые реактивы
1. Карболовый фуксин (1 г основного фуксина растворяют в 10 мл этилового спирта, раствор выливают в 100 мл 5%-ного раствора карболовой кислоты).
2. 3%-ный спиртовой раствор соляной кислоты (3 мл соляной кислоты и 97 мл этилового спирта).
3. Водный 0,5%-ный раствор метиленового синего.
Ход окраски
На препарат кладут кусочек фильтровальной бумаги и наливают раствор карболового фуксина. Препарат нагревают над пламенем горелки до появления паров, охлаждают и снова нагревают (3 раза). Дают остыть, сбрасывают фильтровальную бумагу. Опускают препарат в солянокислый спирт для обесцвечивания. Обесцвечивают до полного отхождения краски. Промывают водой. Докрашивают препарат метиленовым синим в течение 20–30 с. Промывают водой и высушивают на воздухе. Микроскопируют с иммерсионной системой.
Туберкулезные микобактерии окрашиваются в красный цвет, все остальные элементы мочи и бактерии – в синий. Туберкулезные микобактерии имеют вид тонких, слегка изогнутых палочек различной длины, с утолщениями на концах или посередине, располагаются группами и поодиночке.
Анализаторы мочи
Анализаторы мочи лабораторные. Полуавтоматические, автоматические и применяемые у постели больного. Применяются для качественного или количественного определения химических и клеточных компонентов в клиническом образце мочи. Спектр данных включает в себя билирубин, гемоглобин, глюкозу, кетоны, нитраты, белок, pH, удельную плотность, уробилиноген, кровь, эритроциты, лейкоциты, соли, цилиндры, сперматозоиды, микроорганизмы (в частности, бактерии). Принцип работы основан на технологии, в которую могут быть включены электрический импеданс, электропроводность, ферментная спектрофотометрия, нефелометрия, фотометрия.
Глава 8Исследование кала
Макроскопические и микроскопические исследования фекальных масс заслуживают большого внимания главным образом у больных с заболеваниями пищеварительного тракта. Перед тем как говорить об этих исследованиях как таковых, следует прежде всего обратить внимание на некоторые меры, которые в целях правильно проводимых исследований должны обязательно соблюдаться. Результаты исследования зависят от правильной подготовки больного и от правильного сбора, хранения и доставки материала исследования.