Исследование грудного молока
Принцип метода
При нагревании женского молока до 60 °С аммиаком получается фиолетовое окрашивание.
Необходимый реактив
10%-ный раствор аммиака.
Ход исследования
Молоко из молочной железы получают путем сцеживания руками или аппаратом в любое время между кормлениями ребенка, однако лучше сцедить небольшое количество молока до кормления и после него, а затем обе порции смешать. Лучшее время для взятия молока – 9–10 ч.
В пробирку наливают 2 мл молока, добавляют 2 мл раствора аммиака. Затем пробирку встряхивают. Через несколько минут исследуемое молоко окрашивается в фиолетовый цвет.
Окраска исследуемого молока в фиолетовый цвет указывает на принадлежность его женщине. Реакция особенно хорошо выражена в позднем лактационном периоде.
Исследуемое молоко наливают в стеклянный цилиндр и погружают в него ареометр. Цилиндр в строго вертикальном положении держат против света. Мениск молока указывает на шкале ареометра цифру удельного веса. Он колеблется между 1,026–1,036 при температуре 15 °С. Если температура воздуха выше или ниже, на каждый градус добавляют (если она выше 15 °C) или убавляют (если она ниже 15 °C) к указанию ареометра 0,001. Молоко для исследования удельного веса лучше всего получать в течение второго часа после кормления ребенка.
Принцип метода
Концентрированная серная кислота приводит к осаждению жира.
Необходимые реактивы
1. Серная кислота удельного веса 1,83–1,84.
2. Кислотно-алкогольная смесь (равные части амилового спирта и концентрированной соляной кислоты).
Оборудование: бутирометр.
Ход исследования
Исследуемое молоко узкой пипеткой вливают в бутирометр до метки «5». Прибавляют серную кислоту до горлышка бутирометра. Затем вращательными движениями содержимое бутирометра доводят до гомогенной смеси. После этого горлышко бутирометра наполняют кислотно-алкогольной смесью и центрифугируют в течение 1–2 мин. Отделившийся жир отсчитывают по шкале бутирометра (в процентах). Если уровень жира не доходит до метки «0», прибавляют к смеси горячую воду и вновь центрифугируют. Если процент жира выше 5, содержимое бутирометра разводят равным объемом воды и вновь центрифугируют, а полученный при этом процент жира умножают на 2.
Среднее содержание жира в женском молоке составляет 3,7%.
На очищенное и обезжиренное предметное стекло наносят пипеткой одну каплю исследуемого молока и покрывают покровным стеклом. Препарат рассматривают в микроскопе при опущенном конденсоре при среднем увеличении. Видны капельки жира, большее или меньшее число лейкоцитов, бактерии.
У здоровой женщины в молоке видны множество жировых капель, единичные лейкоциты, иногда бактерии. При воспалительных процессах (мастит) в препарате молока имеется большое число лейкоцитов (нейтрофилы) и микроорганизмов, главным образом стафилококков, в меньшей степени стрептококков; изредка встречаются и другие микробные ассоциации.
Исследование выделений из соска вне лактационного периода
Выделения из соска могут быть при заболеваниях молочной железы различной этиологии (воспалительные процессы, туберкулез, актиномикоз, мастопатии, новообразования и др.). Из полученного материала готовят нативные препараты (каплю отделяемого помещают на предметное стекло и покрывают покровным) и тонкие мазки для цитологического, а при необходимости и бактериоскопического исследования.
Цитологическое исследование для решения вопроса о новообразовании требует большого опыта и навыка исследователя.
При бактериоскопическом исследовании мазков можно обнаружить кокковую и палочковую флору. При подозрении на туберкулез препараты красят по Цилю—Нильсену.
Глава 10Исследование мокроты
Сбор и обезвреживание материала
Мокротой называется патологический секрет, выделяемый с кашлем из легких и дыхательных путей. Больным при организации сбора мокроты необходимо разъяснять, что для исследования нужно собирать мокроту, выделенную при откашливании, а не слюну и слизь из носоглотки.
Для сбора мокроты используют чистую, сухую, широкогорлую склянку. Существуют индивидуальные плевательницы из темного стекла, с завинчивающимися крышками и градуировкой на боковой поверхности.
Сбор мокроты для общего клинического анализа осуществляется утром до приема пищи, примесь которой мешает исследованию. Собирают мокроту после тщательного полоскания рта и горла, чистки зубов.
Перед забором полость рта можно тщательно прополоскать раствором пищевой соды, фурацилина (1 : 5000), 0,01%-ным раствором калия перманганата. После этого больной, откашливаясь, собирает в посуду 3–5 мл мокроты. Анализ мокроты производят в день ее выделения.
Мокроту необходимо направить в лабораторию в течение 2 ч с момента забора, так как длительное стояние ведет к размножению флоры и аутолизу клеточных элементов. При необходимости мокроту сохраняют в холодильнике.
Сбор мокроты для выявления микобактерий туберкулеза осуществляется в течение суток, так как в лабораторию необходимо представить достаточное ее количество – не менее 12–15 мл.
Для сбора мокроты на чувствительность к антибиотикам используют стерильные чашки Петри.
В ряде случаев больной не может собрать мокроту на исследование в связи с ее малым количеством или трудностью отделения. Тогда накануне сбора мокроты больному дают отхаркивающие или муколитические средства (термопсис, йодистый калий).
Мокрота чаще всего инфицирована, поэтому по окончании работы исследуемый материал, посуду, в которой он находился, предметные стекла следует обеззараживать. Обеззараживание производят физическими и химическими методами. К физическим методам относится кипячение в воде с добавлением соды в течение 1 ч, а также автоклавирование при температуре 120 °С в течение 30 мин.
Препаровальные иглы после употребления немедленно прокаливают на огне.
Для обеззараживания химическим методом используют активированные аммонийными соединениями растворы хлорамина и хлорной извести (50 г хлорамина и 50 г сульфата или хлорида аммония на 1 л дистиллированной воды). Заливают инфицированный материал двойным количеством дезинфицирующего раствора и оставляют на 4 ч. Можно использовать ДТСГК (двутретьосновную соль гипохлорида кальция), обладающую большой бактерицидной активностью. После обеззараживания посуду моют обычными средствами.
Мокроту с микобактериями туберкулеза дезинфицируют кипячением вместе с плевательницами или раздельно в 2%-ном растворе гидрокарбоната натрия в течение 15–20 мин с момента закипания.
Для химической дезинфекции мокроту обрабатывают 5%-ным раствором хлорамина в течение 6 ч (так как лекарственно-устойчивые микобактерии туберкулеза могут обладать повышенной устойчивостью к дезинфицирующим препаратам, целесообразно увеличить экспозицию в этих случаях до 12 ч), 2,5%-ным активированным хлорамином в течение 2 ч.
Оба эти препарата применяют в соотношении: 1 часть мокроты – 2 части дезинфицирующего раствора. Для дезинфекции мокроты используют также хлорную известь в соотношении: 100 мл мокроты – 20 г сухой хлорной извести; после перемешивания дезинфекция продолжается 1 ч.
Физические свойства мокроты
Консистенция тесно связана с характером мокроты и может быть вязкой, густой, жидкой.
Вязкость зависит от содержания слизи и от количества форменных элементов (лейкоцитов, эпителия). Количественное измерение вязкости проводится с помощью специального капиллярного вискозиметра. Вязкая мокрота обнаруживается при муковисцидозе, бронхиальной астме. При хронических неспецифических заболеваниях легких выявлена зависимость между величиной вязкости мокроты и содержанием в ней мукополисахаридов, ДНК, нейтрофилов и других продуктов воспалительной реакции. Так, вязкость слизисто-гнойной и гнойной мокроты существенно выше, чем слизистой. Величина вязкости отражает степень обсемененности мокроты патогенными бактериями. Установлено, что повышение в мокроте уровня патогенных микробов, протеолитические ферменты которых активно расщепляют мукополисахариды, ведет к снижению вязкости. Величина вязкости расценивается как один из показателей активности легочного воспалительного процесса: при усилении бактериального воспаления наблюдается разжижение мокроты, в процессе успешной антибактериальной терапии вязкость мокроты повышается, а ее суточный объем уменьшается.
Количество мокроты может меняться в широких пределах от 10 до 100 мл. Суточное количество, как и величина отдельных порций, зависит, с одной стороны, от характера заболевания, с другой – от способности больного к отхаркиванию. Скудное количество мокроты выделяется при воспалении дыхательных путей (ларингите, трахеите, остром бронхите в начальной стадии, бронхиальной астме, бронхопневмонии). Обильное количество мокроты (от 0,5 до 2 л) выделяется обычно из полостей легочной ткани, бронхов (бронхоэктатическая болезнь, абсцесс легкого, прорыв эмпиемы) при кровенаполнении легких и пропотевании в бронхи большого количества плазмы крови (отек легких).
При отставании значительного количества гнойной мокроты можно обнаружить 2 слоя (гной и плазма) или 3 (гной, плазма и комочки слизи на поверхности). Двухслойная мокрота характерна для абсцесса легкого, трехслойная – для бронхоэктатической болезни, туберкулеза легких (при наличии каверн).
Цвет и прозрачность зависят от характера мокроты, так как преобладание одного из субстратов (слизи, гноя) придает мокроте соответствующий оттенок, а также от состава вдыхаемых частиц. Чаще мокрота бесцветная, изменение цвета мокроты возникает при различных заболеваниях. Слизистая мокрота стекловидная, прозрачная, слизисто-гнойная – стекловидная с желтым оттенком, гнойно-слизистая – желто-зеленоватая, гнойная – желто-зеленая, слизисто-кровянистая – стекловидная с розоватым или ржавым оттенком, слизисто-гнойно-кровянистая – стекловидная с желтыми комочками, прожилками красного цвета или ржавым оттенком; отделяемое при легочном кровотечении жидкое, прозрачно-желтое, с опалесценцией, пенистое и клейкое из-за присутствия белков плазмы. Отделяемое при легочном кровотечении жидкое, красного цвета, пенистое (за счет содержания пузырьков воздуха). При злокачественных новообразованиях (распаде опухоли) изредка может наблюдаться мокрота в виде «малинового желе».